[发明专利]一种蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的发酵生产工艺

说明书

本发明涉及一种蝙蝠蛾拟青霉Cs‑4的发酵生产工艺，包括斜面培养、摇瓶培养、种子罐培养、繁殖罐培养和发酵罐培养，发酵结束后的发酵液可作为摇瓶培养的种子。斜面培养基中含组氨酸，摇瓶培养基中含组氨酸和维生素B₁，种子罐培养基中含嘌呤，繁殖罐培养基中含有嘌呤和嘧啶，发酵罐培养基中含有嘌呤和嘧啶，培养得到的菌粉中核苷含量高。往液体发酵培养基中添加三七粉后，制得的虫草菌粉中含有皂苷，麦角甾醇含量也提高。摇瓶培养时采用红光照射，能提高菌粉中活性成分的含量。本发明所述工艺操作简单，发酵周期短，成本低，适合工业化大生产。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及一种蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的发酵生产工艺。

背景技术

冬虫夏草仅仅是我国190多种虫草中的一种，主产于青藏高原上，又简称虫草。虫草是麦角菌科真菌冬虫夏草寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，主要活性成分为虫草素、虫草酸、虫草多糖等有益于人体吸收的物质，冬虫夏草是我国传统的名贵药膳滋补品，它性平味甘，具有补肺肾、止咳嗽、益虚损、养精气之功能。据临床研究报道，冬虫夏草具有养肺阴，补肾阳、止咳化痰、抗癌防老的功效，为平补阴阳之品，诸无所忌。冬虫夏草可用于肺痨咳血，阳痿遗精等症；其药理药效的不可替代作用、生态环境恶劣等使其珍贵而稀少，随着人类生活水平的不断提高，人们对冬虫夏草的需求量越来越大，而资源量却越来越少，供求矛盾越来越突出。为了解决这一问题，近几年，我国生物医学界的研究人员先后分离出多株虫草真菌菌株，试图利用人工发酵方式生产虫草菌丝体，用以代替天然冬虫夏草。经过不懈的努力，有几家已生产出在药理、毒理及功效成份等方面与天然虫草相似的产品，并能实现现代化条件下的大规模生产。

蝙蝠蛾拟青霉Cs-4是从青海采集的新鲜虫草上分离获得的菌株，在中科院微生物研究所进行了菌种鉴定，其发酵物与天然虫草有相似的成份，腺嘌呤、核苷、尿嘧啶、甘露醇、麦角甾醇等有效成份均和天然虫草相似，且药理作用优于天然虫草，毒性更小。因此，蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的大规模、高质量的工业发酵生产对于促进人们身体健康，提高生活质量有重要意义。

发酵培养虫草菌株是制备虫草产品的前提，传统的虫草菌株发酵工艺存在发酵得率低、发酵时间长和成本高等问题。因此，出现了静置发酵、间歇发酵和补料分批发酵等工艺，但这些发酵工艺仍存在各种问题，比如染菌率高、发酵周期长、成本高和发酵产物中的活性成分含量低等。因此，研究高收率、低成本，且发酵得到的虫草菌粉产品中的活性成分含量高的发酵工艺十分必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的发酵生产工艺，提高发酵产物的收率及其中的活性成分含量，缩短发酵时间、降低成本。

具体来说，针对现有技术的不足，本发明提供了如下技术方案：

一种蝙蝠蛾拟青霉Cs-4的发酵生产工艺，该发酵生产工艺包括以下步骤：

S1.斜面培养：将Cs-4菌株接种到斜面培养基上，在15-20℃恒温下培养7-9天，斜面培养基中含有组氨酸；

S2.摇瓶培养：无菌条件下，往摇瓶培养基内接入步骤S1培养好的菌种，置于15-20℃恒温摇床、光照条件下培养7-9天，摇瓶培养基中含有组氨酸和维生素B₁；

S3.种子罐培养：无菌条件下，按照3-5％的接种量接入步骤S2培养好的菌种，种子罐培养基中含有嘌呤；

S4.繁殖罐培养：无菌条件下，按照9-12％的接种量接入步骤S3培养好的菌种，繁殖罐培养基中含有嘌呤和嘧啶；

S5.发酵罐培养：无菌条件下，按照5-20％的接种量接入步骤S4培养好的菌种，发酵罐培养基中含有嘌呤和嘧啶；发酵罐培养结束后，得到发酵液；

或者，按照1-2％的接种量将步骤S5的发酵液接至摇瓶培养基内，按照步骤S2的条件进行摇瓶培养，然后重复步骤S3-S5，发酵培养Cs-4菌株。