[发明专利]促进骨骼肌损伤修复的寡核苷酸、药物及应用

说明书

本发明涉及生物医学领域，具体地说是涉及一种用于促进骨骼肌损伤修复的寡核苷酸及其应用方法。本发明首次公开了从人源发育印迹基因H19的转录本中筛选出具有显著促进骨骼肌肌母细胞成肌分化的寡核苷酸，其特征如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2序列所示。该寡核苷酸及其应用方法具有操作简便、无风险，促进骨骼肌损伤后新生肌纤维的再生快、功能恢复良好的优点。据此认为本发明公开的寡核苷酸及使用方法在急性顿挫伤、挤压伤、爆炸伤或化学物质所致骨骼肌损伤的基因治疗中具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有调控骨骼肌肌母细胞成肌分化功能的寡核苷酸，药物及其用于促进骨骼肌损伤修复的应用方法。

背景技术

骨骼肌损伤是事故创伤、灾害损伤、运动损伤或化学毒物所致损伤的常见病。骨骼肌损伤后自然愈合过程缓慢，愈合能力有限，常常伴有肌肉纤维瘢痕形成，功能恢复常常不完全，严重者甚至丧失运动能力。传统治疗骨骼肌损伤的方法包括休息、冰敷、加压、抬高患肢、热疗、水浴等，治疗过程漫长，疗效较差。目前临床上尚缺乏特别有效的骨骼肌损伤治疗方法。因此，如何有效预防骨骼肌损伤后修复不良，有效地促进骨骼肌再生愈合，提高骨骼肌的愈合质量，成为再生医学领域极具挑战性的世界难题。

骨骼肌损伤后的自然病理过程可分为三期：①炎症期：肌肉损伤处血肿形成，损伤肌肉坏死、退化。中性粒细胞浸润，巨噬细胞趋化到损伤处吞噬坏死组织；②修复期：位于损伤肌肉周围处于静止期的卫星细胞，受细胞因子刺激活化，趋化到损伤处增殖、分化形成新生肌管，并与残余的肌纤维融合；同时伴有成纤维细胞增殖，如果损伤范围过大，成纤维细胞的过度增殖分化形成瘢痕性组织，从而造成骨骼肌的愈合失常和功能不良；③塑形期：再生骨骼肌成熟，瘢痕组织机化。

损伤的骨骼肌经自然愈合往往不能完全恢复到损伤前的功能状态，最近研究表明其主要原因是骨骼肌肌母细胞增殖分化与成纤维细胞的增殖分化失衡有关。故当前促进骨骼肌修复的研究主要集中在剌激骨骼肌肌母细胞增殖分化和抑制损伤骨骼肌纤维化两个方向。

microRNA作为一类具有生物学活性的非编码小分子RNA，参与了各种组织器官发育和疾病的发生、发展调控过程。Dicer基因编码的蛋白是miRNA成熟加工过程中所必需的核酸内切酶。组织条件性敲除Dicer基因后小鼠的骨骼肌发育出现异常(骨骼肌组织含量减少，肌纤维形态异常等)，表明miRNA在骨骼肌发育过程中发挥重要作用。

研究报道蛇心脏毒素(Cardiotoxin，CTX)致伤小鼠骨骼肌再生过程中miR-1和miR-125b表达量上调，胰岛素样生长因子2(IGF-2)(miR-125b下游靶基因)表达量增加，IGF-2调节成肌细胞分化，从而促进新生肌纤维的再生融合进程。诸多miRNA参与调控损伤骨骼肌的再生修复过程，提示外源性寡核苷酸的应用可能成为促进骨骼肌损伤修复的一种有效方法。

研究发现发育印迹基因H19在人和小鼠胚胎中广泛表达，具有调控胚胎生长、胎儿发育及小儿行为发展等重要功能。最新研究表明H19基因的转录本内包含有miR-675，并且其转录本在成年小鼠骨骼肌中呈持续性高表达，提示H19基因通过mRNA参与了骨骼肌的发育与功能调控。

发明内容

本发明针对上述问题，目的在于提供一种寡核苷酸、包含该寡核苷酸的药物及应用方法。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一方面，本发明实施例公开了一种寡核苷酸，其包含如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列。

另一方面，本发明实施例公开了一种药物，其包含上述寡核苷酸。