[发明专利]抗Napsin A蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种新的胃蛋白酶样天门冬氨酸蛋白酶(Napsin A)的单克隆抗体，及其杂交瘤细胞株21A5的制备方法，该单克隆抗体在肿瘤发生及预后评价的用途。制备该抗体的抗原为一段优选的抗原肽，经化学合成后与KLH载体蛋白偶联为免疫原后免疫小鼠，最终获得的抗体属于IgG2b亚型，编码其可变区的序列经基因克隆的方式获得。最终获得的抗体对多种肿瘤组织的免疫组织化学检测发现，该抗体可以很好的鉴别肿瘤的发生，可以用于这些肿瘤的免疫学诊断。

技术领域

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗Napsin A蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。

背景技术

原发性肺癌(以下简称肺癌)是我国最常见的恶性肿瘤之一。中国肿瘤统计报告(Chen W,Zheng R,Baade PD,Zhang S,Zeng H,Bray F,Jemal A,Yu XQ,He J.Cancerstatistics in China,2015.CA Cancer J Clin.2016,66(2):115-32)指出，肺癌是发病率最高的癌症，其死亡率也位居前列。2015年新发肺癌病例为73.33万(男性50.93，女性22.40万)，同期，我国肺癌死亡人数为61.02万(男性43.24万，女性17.78万)，占恶性肿瘤死因的21.68％。

在高危人群中开展肺癌筛查有益于早期发现早期肺癌，提高治愈率。低剂量CT(low-dose computed tomography，LDCT)发现早期肺癌的敏感度是常规胸片的4-10倍，可以早期检出早期周围型肺癌。肺癌筛查还可结合免疫组化等技术开展，包含的信息应满足临床分期的需要，并给出pTNM分期。

2015版的WHO在肺癌分类方法中融入了更多的遗传信息，更加重视免疫组化和分子诊断对肺癌分类的重要性，然而没有任何一种分类可以囊括肺癌的所有特性，病理分类的重要性在于指导治疗和预后。William D.Travis根据细胞起源提出把类癌、小细胞肺癌和大细胞神经内分泌统归入神经内分泌肿瘤，这个分类存在巨大争议。腺癌与鳞状细胞癌鉴别的免疫组化标记物宜选用TTF-1、NapsinA、p63、P40和CK5/6；神经内分泌肿瘤标记物宜选用CD56、Syn、CgA、Ki-67和TTF-1，在第2015版分类方法中还指出，在浸润性黏液型腺癌的诊断中，不表达TTF-1和NapsinA，胶样腺癌中弱表达或病灶表达TTF-1和NapsinA，肺大细胞癌的先决条件是表达TTF-1和NapsinA和鳞癌标志物及黏液染色均为阴性，诊断时需注重与腺癌实体亚型(TTF-1、NapsinA、黏液染色阳性；P40、P63(4Aa)、CK5/6阴性)、非角化性鳞癌(TTF-1、NapsinA、黏液染色阴性；P40、P63(4Aa)、CK5/6阳性)和腺鳞癌(不同区域有腺癌和鳞癌，且每一种成分要＞10％)鉴别。因为Napsin A蛋白表达情况和肿瘤发生、发展的密切关系，因此，获得针对Napsin A的优质抗体一直受到重视。