[发明专利]一种检测香豆素的试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种检测香豆素的试纸条及其制备方法和应用。该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其中，所述反应膜上具有包被有香豆素半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有香豆素单克隆抗体‑胶体金标记物，所述香豆素半抗原是由香豆素进行缩醛反应得到的。本发明还提供了香豆素试纸条的制备方法及应用上述试纸条检测样品中香豆素的方法。本发明提供的试纸条和检测方法具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制的优点，能够实现对大批量的香豆素样品进行快速检测和现场监控。

技术领域

本发明涉及一种检测香豆素的试纸条及其制备方法和应用，具体涉及一种用于检测香豆素的胶体金试纸条，其特别适用于烟用香精香料、烟草及烟草制品中香豆素的检测。

背景技术

香豆素系化合物是一类具有芳香气味，母核为苯并α-吡喃酮结构的天然产物，广泛分布于植物界，根据结构可分为简单香豆素系化合物、呋喃香豆素系化合物、吡喃香豆素系化合物和其他香豆素系化合物等。香豆素（coumarin）又名邻羟基桂酸内酯和1,2-苯并吡喃酮，是一种天然植物次生产品，是广泛存在于自然界中的一种内酯类化合物，于1820年发现于黑香豆中，主要以游离状态和苷的形式存在于植物中，在芸香科和伞形科植物中最多，其次存在于豆科、兰科、木樨科、茄科和菊科植物，少数来自微生物。香豆素作为一种重要的香料，常用作定香剂、脱臭剂，配制香水和香料，也用作饮料、食品、卷烟、塑料制品、橡胶制品等的增香剂，医药上将其加入药剂中作为矫味剂。实验发现，香豆素对小鼠胚胎有毒性，能引起痛觉消失，使中性胆碱酯酶发生变化，对大鼠为可疑致肿瘤物。香豆素在体内的含量达到一定量时具有生理毒性，通过长期的动物实验发现其具有肝毒性，主要是由代谢的途径导致P450（细胞色素P）及其依赖性酶的减少引起的。美国食品药品管理局（FDA）早在1954年就禁止将香豆素用作食品添加剂；欧洲食品安全局（EFSA）规定香豆素的每日耐受摄入量（TDI）为0.1 mg/kg bw；欧盟规定，对于洗去型化妆品，香豆素的含量不得超过30 μg/g，对于非洗去型化妆品，香豆素含量不得高于10 μg/g；2010年7月，台湾地区食品管理机构发布通知禁止在食品中添加香豆素，同时规定“惟饮料中因使用天然香料，导致天然香料本身含香豆素残留时，其含量仍应在2.0 mg/kg以下”。

烟用香精香料在生产制造过程中有可能由天然植物精油引入香豆素，进而通过烟丝中添加的香精香料存在于烟草制品中，对消费者的健康造成潜在危害。因此，建立香豆素的快速检测方法，对香精香料及烟草制品进行质量控制十分必要。

目前，香豆素主要通过直接萃取法、超声萃取法、同时蒸馏萃取法、水蒸气蒸馏法等提取，结合气相色谱法（GC）、气相色谱-质谱法（GC-MS）、气相色谱-串联质谱法（GC-MS/MS）、高效液相色谱法（HPLC）、超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）检测。仪器分析方法虽可以实现准确定性定量，但需要复杂昂贵的仪器设备及专业操作人员，加之样品前处理繁琐费时、检测费用高，难以满足现场监控和大量样本筛查的需要。因此，开发一种不受检测设备限制并且能够实现对大批量样品进行快速检测的产品和方法成为迫切需要解决的问题。截至目前，与烟用香精香料及烟草中香豆素检测相关的专利和文献报道较少，市场上尚未有香豆素试纸条出现。

发明内容

本发明的目的正是基于上述现有技术状况提供一种检测香豆素的试纸条及其制备方法和应用，本发明应用胶体金免疫层析法测定烟用香精香料及烟草制品中的香豆素，具有准确度高、操作简单、无需专业人员操作、无需配套其他检测设备、方便携带检测、时间短、检测成本低等特点，适用于现场大量样品的筛查。