[发明专利]一种检测香豆素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测香豆素的时间分辨荧光免疫层析试纸条，包括底板及在底板上依次搭接粘贴的样品吸收垫、结合物释放垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于：所述结合物释放垫上包埋有荧光微球标记的香豆素单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有香豆素半抗原-载体蛋白偶联物，所述质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体；所述香豆素单克隆抗体是以香豆素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述香豆素半抗原-载体蛋白偶联物是由香豆素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述香豆素半抗原是由香豆素进行缩醛反应得到，其分子结构式为：

所述香豆素半抗原的制备反应过程如下：

。

2.根据权利要求1所述的检测香豆素的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述荧光微球是直径为100~300 nm的用聚苯乙烯包裹荧光物质的微球，其表面连接有—COOH基团。

3.根据权利要求2所述的检测香豆素的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述荧光物质为镧系。

4.根据权利要求1所述的检测香豆素的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白或人血清白蛋白。

5.一种权利要求1-4任一所述的检测香豆素的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）结合物释放垫的制备：用荧光微球标记香豆素单克隆抗体，并将其以特定缓冲体系稀释后，将结合物释放垫浸泡于稀释缓冲液中，经真空冷冻干燥后制备；

2）硝酸纤维素膜的制备：将权利要求1中所述的香豆素半抗原-载体蛋白偶联物喷涂到硝酸纤维素膜上的检测区范围，制成检测区；将羊抗鼠抗抗体喷涂到硝酸纤维素膜上的质控区范围，制成质控区；

3）组装和剪切：在底板上依次搭接地粘贴样品吸收垫、包埋有荧光微球标记香豆素单克隆抗体的结合物释放垫、固定有检测区和质控区的硝酸纤维素膜及吸水垫，并剪切成所需的宽度即为时间分辨荧光免疫层析试纸条。

6.一种应用权利要求1-4任一所述的检测香豆素的时间分辨荧光免疫层析试纸条检测样品中香豆素的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）样品前处理；

2）用所述试纸条对样品进行检测；

3）用荧光检测仪分析检测结果。