[发明专利]FR179642的制备方法在审
| 申请号: | 201810536326.4 | 申请日: | 2018-05-30 |
| 公开(公告)号: | CN108753881A | 公开(公告)日: | 2018-11-06 |
| 发明(设计)人: | 袁建栋;别一 | 申请(专利权)人: | 博瑞生物医药(苏州)股份有限公司;重庆乾泰生物医药有限公司 |
| 主分类号: | C12P21/04 | 分类号: | C12P21/04;C12R1/645 |
| 代理公司: | 苏州知途知识产权代理事务所(普通合伙) 32299 | 代理人: | 马刚强 |
| 地址: | 215123 江苏省苏州市苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 发酵 制备 大豆卵磷脂 发酵培养基 交联酶聚体 种子培养液 棕榈酸甲酯 发酵培养 培养基 混合物 发酵液 补加 菌株 脱酰 接种 转化 | ||
1.一种FR179642的制备方法,该方法包括:
1)、发酵FR901379的培养基的制备;
2)、将菌株Coleophoma empetri种子培养液接种于发酵培养基进行发酵;
3)、在发酵培养24~72h后,向发酵液中补加棕榈酸甲酯和大豆卵磷脂混合物;
4)、当发酵160h后,FR901379的浓度不再增长时,发酵结束;
5)、将上一步得到的FR901379与脱酰酶交联酶聚体反应,转化为FR179642。
2.如权利要求1所述的方法,向发酵液中加入棕榈酸甲酯和大豆卵磷脂混合物的质量体积比为3~10%。
3.如权利要求2所述的方法,棕榈酸甲酯和大豆卵磷脂混合物中,大豆卵磷脂所占质量体积比为10~30%。
4.如权利要求1所述的方法,发酵培养基的组成为:葡萄糖、棉籽饼粉、酵母粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸氢二钾、碳酸钙、消泡剂、水。
5.如权利要求1所述的方法,其中,脱酰酶交联酶聚体的制备方法为将脱酰酶粗酶与交联保护剂牛血清白蛋白、交联剂戊二醛反应,以形成脱酰酶交联酶聚体。
6.如权利要求5所述的方法,脱酰酶交联酶聚体的制备方法为将脱酰酶粗酶加入磷酸缓冲液后,再加入牛血清白蛋白作为交联保护剂,通入空气,搅拌后静置,再向上述反应液中加入交联剂戊二醛,搅拌,以形成脱酰酶交联酶聚体。
7.如权利要求6所述的方法,磷酸缓冲液含磷酸二氢钾2~2.5g/L,磷酸氢二钠1~1.5g/L,pH为5.5~6.5,粗酶的加入量为1~3%,牛血清白蛋白的加入量为1~3g/L,通入空气的每分钟流量相当于料液体积的10~30%,搅拌时间为20~60分钟,搅拌速度为50~150rpm,静置条件为温度4~15℃、时间0.5~2小时,戊二醛加入量为10~30mmol/L,加入戊二醛后的搅拌条件为温度28~32℃、时间1~3小时。
8.如权利要求7所述的方法,磷酸缓冲液含磷酸二氢钾2.24g/L,磷酸氢二钠1.24g/L,pH为6.0。
9.如权利要求7所述的方法,粗酶的加入量为2%。
10.如权利要求7所述的方法,牛血清白蛋白的加入量为2g/L。
11.如权利要求7所述的方法,戊二醛加入量为20mmol/L。
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