[发明专利]一种半夏组织培养快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种半夏组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：取半夏叶柄作为外植体，清洗并消毒；将半夏叶柄剪成合适的尺寸，接种于诱导培养基上诱导出愈伤组织；将分化的半夏愈伤组织转接到增殖培养基上，分化出半夏苗；将分化好的半夏苗接到无糖快繁培养容器中，3‑5天后通CO₂气体，得到生长整齐、生根多的半夏苗即可移植。本发明的半夏组织培养快速繁殖方法优于传统的块茎和株芽等方法进行无性繁殖，解决了种苗繁殖慢、数量少、种苗带病毒等问题。

技术领域

本发明涉及植物细胞工程技术领域，具体来说，涉及一种半夏组织培养快速繁殖方法。

背景技术

半夏（学名：Pinelliaternata）属天南星目，是一种药用植物，也叫“旱半夏”。我国野生半夏资源主要集中在四川、湖北、安徽、云南和贵州等省区；人工栽培量较大的主要是甘肃、山西、山东、贵州和云南等省区。半夏系浅根草本植物，高15cm～30cm，多为单叶，从块茎顶端长出，长大后分出三片小叶，从叶柄基部可长出具有繁殖能力的株芽，地下块茎直径一般为1cm～2cm，近球形，所以国外多称之为“球茎”。半夏为雌雄同株，分别生于绿色佛焰苞的两端，花期在5月～7月，果期8月～10月。

作为一种药用植物，半夏是统称，泛指三叶半夏、盾叶半夏、水半夏等，它们都有燥湿化痰；降逆止呕；消痞散结的作用。常用中药，饮片配方和中成药生产用量较大，属较好的温寒化痰药，其它药很难替代。

半夏受到人们的连年采挖，野生半夏资源几乎被耗尽，并且半夏栽培主要是块茎和珠芽繁殖，但产量和块茎品质每况愈下，这是因为病毒性疾病经过几代传播积累，致使病毒害严重影响其产量和质量。伴随现代生产技术的快速发展，为满足用药需求，人工长期高密度种植块茎，使大豆花叶病毒 SMV 和黄瓜花叶病毒 CMV 等在植株中大量积累，有研究报道，在蚜虫高发季节病毒会大面积传播，轻者植株叶片萎蔫枯黄，严重将导致半夏块茎减产高达 60%，一旦感染终身将会携带病毒，严重危害半夏种质及品质。同时，半夏极易杂草化，造成产量下降。

80年代早期，国内和国外的实验室接踵开展半夏组织培养研究，选用半夏植株不同部位诱导产生所需求的愈伤组织，进行丛生芽和生根苗的研究，与此同时半夏一步成苗研究技术也相继报道。但目前没有一个优质的半夏组织培养的快速繁殖方法。

发明内容

针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种半夏组织培养快速繁殖方法，能够克服现有技术的上述不足。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种半夏组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：

（1）半夏外植体的消毒与接种：取半夏叶柄作为外植体，清洗并消毒；将半夏叶柄剪成合适的尺寸，接种于诱导培养基上诱导出愈伤组织，诱导培养基配方为MS+TDZ0.07mg/L+NAA0.2mg/L+3wt%蔗糖；

（2）半夏增殖：将分化的半夏愈伤组织转接到增殖培养基上，分化出半夏苗，增殖培养基配方为MS+TDZ0.05mg/L+NAA0.05mg/L+3wt%蔗糖；

（3）半夏生根培养：将分化好的半夏苗接到无糖快繁培养容器中，3-5天后通CO₂气体，得到生长整齐、生根多的半夏苗。

进一步的，诱导培养条件为：温度25 ± 1℃，光照强度为2000Lx，每天光照12h。

进一步的，诱导培养的周期为25天。

进一步的，增殖培养的周期为30天。

本发明的有益效果：

（1）本发明的半夏组织培养快速繁殖方法优于传统的块茎和株芽等方法进行无性繁殖，解决了种苗繁殖慢、数量少、种苗带病毒等问题；

（2）本发明采用的增殖配方分化率高，增殖数量大，增殖时间短；