[发明专利]一种快速测定植物POD的方法

说明书

本发明公开了一种快速测定植物POD的方法，包括水浴浸泡、样品研磨、酶液提取、酶活力测定，本发明的有益效果是：将传统方法，研磨效果好，特别是对于质地硬的植物组织，如种子等可达到简单、快速检测植物中的POD酶活力的目的，有利于实现批量操作。

技术领域

本发明属于植物酶活力检测方法技术领域，特别涉及一种快速测定植物POD的方法。

背景技术

植物在生理代谢过程中伴随着部分电子逃逸，产生具有毒害作用的高能量活性氧，其中包括O2-、H2O2、单线态氧、羟自由基等。植物细胞的叶绿体、线粒体和质膜等是活性氧产生的主要场所。这些活性氧的积累会使植物细胞受到氧胁迫。为了减轻活性氧对细胞的破坏，维持体内活性氧的动态平衡，植物在进化过程中逐渐形成一套抗氧化酶促系统，包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)。这三种酶的作用分别是SOD催化O2-歧化反应生成H2O2，CAT分解H2O2，POD清除O2-、H2O2和其他过氧化物，与植物的生理代谢和抗逆性有密切关系。植物在生长发育过程中会受到各种不良环境的影响，包括生物胁迫和非生物胁迫。处于逆境下的植物往往会产生大量活性氧，从而也引起抗氧化酶促系统中的酶产生量发生变化以清除过多的活性氧、减少植物受到的氧胁迫。SOD、CAT和POD酶活力的变化能反映出植物所受到的胁迫状况及植物抗逆能力的强弱。因此，上述三种酶是植物生理研究中的重要研究对象，其酶活力的检测是其重要环节。

酶活力(enzyme activity)也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。

POD酶活力的检测方法：

先用冰浴研磨法和0.05mol/L pH 6.0磷酸缓冲液制备粗酶液，然后用愈创木酚法测POD酶活力；

取1g植物叶片等组织于预冷的研钵中，加入预冷的0.05mol/LpH 6.0磷酸缓冲液，研磨成浆，定容后低温离心，上清液为POD粗酶液；

愈创木酚法测定POD酶活力：酶促反应体系包含0.05mol/L pH 6.0磷酸缓冲液、0.01mol/L H2O2、0.005mol/L愈创木酚溶液和0.01-1mL酶液；将上述反应体系于波长470nm下测定吸光度的变化量，以每分钟吸光度变化0.01为一个酶活单位计算POD酶活性。

上述传统方法的缺点主要是：冰浴研磨法步骤繁琐，费时费力，批量操作困难；样品需要量较多，工作量较大。

发明内容

本发明的主要目的是针对上述现有技术中检测POD酶活力时，采用冰浴研磨法步骤繁琐、费时费力、批量操作困难，提供一种快速测定植物POD的方法，可简化操作，省时省力，并减少样品和试剂用量等。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种快速测定植物POD的方法，其特征是包括下述主要步骤：

(1)、水浴浸泡：

取新鲜或超低温保存的植物叶片或其它组织，在水浴中浸泡10min～20min；

(2)、样品研磨：

采用液氮研磨法进行研磨；液氮研磨法，即将样品浸入液氮后用研磨棒研磨；

(3)、酶液提取：

将上述步骤(2)研磨后的样品加入0～4℃预冷的浓度为0.1～0.4mol/L、pH6.5～7.5的磷酸缓冲液进行浸提30min～12h，0～4℃下离心处理，取上清液，POD酶液，0～4℃保存备用；

(4)、酶活力测定：