[发明专利]引物对及包含其的试剂盒、用途和检测蒺藜苜蓿生态型A17和R108的方法

说明书

本发明提供了一种引物对及包含其的试剂盒、用途和检测蒺藜苜蓿生态型A17和R108的方法，涉及生物技术领域。该引物对包含引物NST480‑F和引物NST480‑R，分别具有如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列，可以同时扩增出蒺藜苜蓿生态型A17和R108不同片段长度的DNA片段，因此一次扩增即可分辨出待测样品中是否含有蒺藜苜蓿生态型A17和R108。使用上述引物对检测蒺藜苜蓿生态型A17和R108，具有灵敏性强、准确率高、重复性强和快速便捷等特点，缓解了现有技术中存在的缺乏一种快速而准确的方法检测和鉴别蒺藜苜蓿生态型A17和R108的问题。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种引物对及包含其的试剂盒、用途和检测蒺藜苜蓿生态型A17和R108的方法。

背景技术

蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)作为豆科模式植物，具有耐干旱、耐冷热、高产和优质的特点，同时又能改良土壤，还具有生长周期短、基因组小、遗传转化率高和自花授粉的优点。蒺藜苜蓿，包括紫花苜蓿(M.sativa)在内的大部分豆科植物，在遗传上具有相似性。可以将从蒺藜苜蓿中获取的信息借鉴到其它豆科植物。因此，在植物分子生物学和基因组学研究中蒺藜苜蓿备受关注。

随着畜牧业的发展，牧草的需求量越来越大，安全要求也越来越高。分子生物学手段，在牧草上的作用越来越显著，而豆科牧草作为牧草中最重要的两个科之一，为家畜提供了大量的蛋白质资源，因而对豆科牧草的基因改良是牧草领域的重要课题。

对于豆科植物分子生物学领域，蒺藜苜蓿作为豆科牧草的模式植物，是研究其他优良的基因是否在豆科植物中表达提供了优异的实验材料。准确而高质量的蒺藜苜蓿种子是对实验安全进行的保障，因而准确迅速鉴定出蒺藜苜蓿不同生态型，对于提高我国豆科饲草的分子生物学研究具有十分重要的意义。

蒺藜苜蓿不同生态型A17和R108在实验室里十分常见，但是这两种蒺藜苜蓿生态型在实验室的用途并不相同。A17蒺藜苜蓿基因组序列是由单种子后代测序所得，常用于T-DNA插入分析；蒺藜苜蓿R108生态型因为具有基因组小、种子产量大和种子成熟时间短等特点，所以常被用于研究相关的分子遗传过程。

而这两种生态型的种子在外观形态上极其相似，分辨十分困难，一旦混杂，将对蒺藜苜蓿基因功能研究造成不可挽回的损失，而现在国内外还没有一个统一的、行之有效的鉴别方法。只能依靠肉眼观察，所以结果并不准确。

因此目前十分需要一种快速而准确的方法检测和鉴别蒺藜苜蓿生态型A17和R108。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种检测蒺藜苜蓿生态型A17和R108的引物对，缓解了现有技术中检测蒺藜苜蓿生态型A17和R108技术不足的技术问题，该引物对可以扩增出生态型A17和生态型R108的DNA片段，且扩增产物的片段长度不同，因此可以同时检测出待测样品中是否含有蒺藜苜蓿生态型A17和R108。

本发明的第二目的在于提供一种包含上述引物对的试剂盒，该试剂盒配合其他分子生物学实验中常用试剂具有广泛的用途。

本发明的第三目的在于提供一种上述引物对或上述试剂盒在检测蒺藜苜蓿生态型A17和R108中的用途，该用途十分广泛，例如可以应用于检测待测样品中是否含有蒺藜苜蓿生态型A17和/或R108的成分，例如还可以应用于鉴别蒺藜苜蓿生态型A17和R108；并且具有检测或者鉴别准确，快速，高通量的优点，并且上述引物对或试剂盒还适用于检测或鉴别蒺藜苜蓿生态型A17和R108的突变株，因此用途十分广泛。

本发明的第四目的在于提供一种检测蒺藜苜蓿生态型A17和R108的方法，缓解了现有技术中存在的缺乏一种快速而准确的方法检测和鉴别蒺藜苜蓿生态型A17和R108的问题。

为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：