[发明专利]一种短管赤眼蜂DNA酶及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种短管赤眼蜂DNA酶的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示，将短管赤眼蜂DNA酶的编码基因整合到酵母基因组DNA的表达系统中，并进行高密度发酵和乙醇诱导表达得到短管赤眼蜂DNA酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。本发明的短管赤眼蜂DNA酶具有较强的DNA降解活性，成功应用于去除PCR或qRT‑PCR反应体系中残留的痕量DNA污染，提高致病菌核酸检测试剂盒的准确性。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体是一种短管赤眼蜂DNA酶及其制备方法与应用。

背景技术

DNA酶广泛存在于多种哺乳动物、虾类、昆虫和植物中，对于个体的发育、细胞正常的老化凋亡、以及防御系统的构建具有重要的生物学功能。DNA酶是一种多功能核酸内切酶,可以以非特异性的方式切割DNA,作用于两个脱氧核糖核苷酸之间的3',5'-磷酸二酯键，将DNA链切割开并将其降解成单个核苷酸或寡聚核苷酸。其中研究最多的是哺乳动物和人类的DNA酶，例如来源于牛胰腺的DNase I被广泛应用于生物学研究和医学分子检测试剂盒，而来源于人的重组DNaseI还被应用于一些疾病的治疗，例如囊肿性纤维化(cysticfibrosis,CF)、肺不张和复杂性肺炎伴胸腔积液和脓胸等。

在科学研究和分子临床诊断中，DNA酶是一个功能强大的工具,可用于一系列的分子生物学应用,包括:反转录PCR(RT-PCR，包括荧光定量法和传统的凝胶成像法)去除模板中DNA污染造成的假阳性，组织和细胞RNA提取后基因组DNA污染的去除，核酸法检测病毒和致病菌时模板中DNA污染的去除，以及基因表达调控中DNA顺式作用原件的蛋白质特异性结合鉴定等等。

近些年来的研究发现，DNA酶也是昆虫防御系统的重要组成部分，例如对黄蜂毒液的主要成分进行分析，发现包括组胺、五羟色胺、蛋白酶、缓激肽、DNA酶和透明质酸酶等。相对于人和哺乳动物的DNA酶，昆虫的DNA酶相关的研究相对较少，对它们的活性研究以及应用实例也处在相对缺乏的状态。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种短管赤眼蜂DNA酶及其制备方法与应用。

本发明采用的技术方案如下：通过高通量的DNA和蛋白序列的比对以及活性中心保守序列的分析，发现了一个来源于短管赤眼蜂的全新DNA酶，该酶由一个以前功能未知的基因编码(Trichogramma pretiosum uncharacterized,Genbank accession number:LOC111693613)。

本发明提供的一种短管赤眼蜂DNA酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。

本发明还提供一种编码短管赤眼蜂DNA酶的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供一种重组载体，在质粒pPic9K上插入了含有上述短管赤眼蜂DNA酶的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供一种重组细胞，将上述重组载体转化入宿主细胞中获得，优选毕赤氏酵母GS115。