[发明专利]β-榄香酮酸在制备抗人骨肉瘤药物中的应用

说明书

本发明提供β‑榄香酮酸在制备抗人骨肉瘤药物中的应用，涉及肿瘤治疗领域。β‑榄香酮酸可以应用于制备抗人骨肉瘤药物中。本发明还提供抗人骨肉瘤的药物组合物，其活性成分为β‑榄香酮酸。通过研究β‑榄香酮酸抑制人骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭并诱导凋亡的作用及其分子生物学机制，提示β‑榄香酮酸有望用于制备抗人骨肉瘤药物，从而提高人骨肉瘤患者的治疗效果，延长患者的生命。

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗领域,尤其涉及β-榄香酮酸在制备抗人骨肉瘤药物中的 应用。

背景技术

骨肉瘤是一种最为常见的原发性骨肿瘤，多发生于青少年，每年发病率为 2-5/100万。骨肉瘤主要表现为局部侵袭和早期肺部转移，复发率高，预后极差， 故极易引起患者死亡或者残疾。目前对于骨肉瘤主要采用手术治疗、辅助化疗、 放疗、靶向和免疫治疗等方式。然而骨肉瘤的高度异质性导致其对目前的常规化 疗药物易产生耐药，加之常规化疗药物如甲氨蝶呤、阿霉素、顺铂、异环磷酰胺 等带来的极大副作用影响患者生活质量，长期生存率低，故寻找新型、有效、安 全的抗癌药物对于提高骨肉瘤的治疗效果有着极为重要的意义。

β-榄香酮酸(β-elemonic acid)，结构式如图1所示，是一种目前已知的三萜 类化合物，是橄榄科植物乳香树或同属植物的胶状树脂乳香中的活性成分之一。 现代药理研究表明乳香有抗炎、抗溃疡、降糖、改善记忆等诸多药理活性，不良 反应少，具有潜在的药用价值。但目前尚未有乳香中活性成分β-榄香酮酸在治疗 骨肉瘤方面的研究报道。

发明内容

本发明的目的在于提供β-榄香酮酸在抗骨肉瘤方面的应用，β-榄香酮酸具有 较强的抗人骨肉瘤作用，且对正常细胞的毒性较低。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

β-榄香酮酸在制备抗人骨肉瘤药物中的应用。

抗人骨肉瘤的药物组合物，其活性成分为β-榄香酮酸。

本发明经细胞活力及增殖实验检测，结果表明，经β-榄香酮酸作用24h、 48h、72h后细胞活力检测结果显示，β-榄香酮酸干预143B细胞24h、48h和72h 的IC₅₀值分别为26.69、17.87、13.79μM，干预MG-63细胞24h、48h和72h的 IC₅₀值分别为21.53、10.58、9.958μM，干预HOS细胞24h、48h和72h的IC₅₀值分别为38.68、7.968、7.137μM，经β-榄香酮酸在≥15μM浓度干预下可明显抑 制三种人骨肉瘤细胞的活力，并且其抑制效应呈现剂量依赖性。

β-榄香酮酸作用于正常肝细胞L02 24h的IC₅₀值为47.25μM。而阿霉素作用 于L02细胞24h的IC₅₀值为7.50μM，提示对比阿霉素，β-榄香酮酸对于正常细 胞毒性更小。

本发明经细胞克隆形成实验考察人骨肉瘤细胞在β-榄香酮酸干预下的增殖 能力。细胞克隆形成实验结果表明，β-榄香酮酸干预浓度为7.5、15、30μM实验 组中克隆形成的细胞集落数量明显降低，且呈现剂量依赖性，提示β-榄香酮酸可 以有效的抑制人骨肉瘤细胞增殖。

本发明的细胞凋亡染色实验表明，细胞经Hoechst33258染色后观察到，正 常培养的143B细胞细胞核形态饱满，呈均匀淡蓝色，染色较浅。经β-榄香酮酸 作用后143B细胞数明显减少，胞膜皱缩，细胞核体积相对变小核内DNA不同 程度凝聚、皱缩，细胞核固缩被浓染呈亮蓝色，荧光明显增强，可见凋亡小体等 细胞凋亡特征，且呈现浓度依赖性。

本发明的细胞凋亡率实验表明，随着β-榄香酮酸干预浓度的增加，经 Annexin V-FITC/PI双染后，用流式细胞仪检测结果显示：143B细胞凋亡率(早 期凋亡和晚期凋亡)均逐渐增大，且与正常对照组相比具有统计学差异(P＜0.01)。 提示β-榄香酮酸对143B细胞有诱导凋亡的作用，且呈剂量依赖性。