[发明专利]一种人字果药材中木兰花碱的含量测定方法

说明书

本发明公开了一种人字果药材中木兰花碱的含量测定方法，所述木兰花碱的含量测定方法为：色谱条件：Pntulips BP‑C₁₈柱（4.6mm×250mm，2.5μm）；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸‑0.1%三乙胺水溶液，梯度洗脱；检测波长：260~280 nm；柱温：20~30℃；流速：0.8~1.2mL·min^‑1；进样量：5~20μL。本发明以木兰花碱为测定指标，采用高效液相色谱法，建立人字果药材的含量测定方法，为人字果药材的质量标准研究提供实验依据；所述测定方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，为人字果药材质量控制和评价提供依据。

技术领域

本发明涉及一种人字果药材中木兰花碱的含量测定方法，属于药品技术的领域。

背景技术

人字果药材为毛茛科植物蕨叶人字果Dichocarpum dalzielii(J.R.DrummondHutchinson)W.T.WangP.K.Hsiao的干燥全草，具有清热解毒、消肿止痛等功效，用于跌打肿痛、无名肿毒等病症。2015年贵州食品药品监督管理局立项进行2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》修订研究，将人字果列为新增补药材品种，开展其质量标准研究。通过文献查阅分析，蕨叶人字果的研究报道较少，仅见分类学研究，其化学成分、药理作用等方面研究尚属空白。本实验首先运用液质联用技术对人字果药材中化学成分的结构进行鉴定，主要含有生物碱类和黄酮类等多种成分，经质谱数据及文献资料，推测该药材中可能含有木兰花碱，通过与木兰花碱对照品质谱数据比对，确定该药材中含有木兰花碱。木兰花碱为人字果药材的主要成分，具有良好的促成骨细胞活性以及抗心律失常、抗炎、降压和消除运动性疲劳等作用。目前未见关于人字果药材中木兰花碱含量测定方法的研究报道，限制了对人字果的进一步开发利用。另外，没有对其药效成分进行定量检测，难以控制药材及其成方制剂的质量，无法保证临床用药的安全性和有效性。

发明内容

本发明目的在于，提供一种人字果药材中木兰花碱的含量测定方法。本发明以木兰花碱为测定指标，采用高效液相色谱法，建立人字果药材的含量测定方法，为人字果药材的质量标准研究提供实验依据；所述测定方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，为人字果药材质量控制和评价提供依据。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案实现：一种人字果药材中木兰花碱的含量测定方法，所述木兰花碱的含量测定方法为：

色谱条件：Pntulips BP-C₁₈柱(4.6mm×250mm，2.5μm)；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸-0.1％三乙胺水溶液，梯度洗脱；检测波长：260～280nm；柱温：20～30℃；流速：0.8～1.2mL·min^-1；进样量：5～20μL；

对照品溶液的制备：精密称取木兰花碱对照品适量，置容量瓶中，加70～80％甲醇溶液配成0.30032～0.50032mg·mL^-1的对照品溶液；

供试品溶液的制备：取人字果药材粉末0.8～1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30～90％甲醇溶液20～50mL，称定重量，超声提取，取出，放冷，加相应甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，取15mL续滤液，用石油醚萃取，至石油醚层无明显变化后，得下层萃取液，即得供试品溶液；

HPLC法测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即可。

前述的人字果药材中木兰花碱的含量测定方法中，梯度洗脱时，梯度洗脱程序为：

0～10min，5％～20％A，10～30min，20％～40％A。

前述的人字果药材中木兰花碱的含量测定方法中，所述的超声提取是：在功率100W，频率40Hz下超声提取30～60min。