[发明专利]一种利用高速逆流色谱分离枳壳中化合物的方法

说明书

本发明公开了一种利用高速逆流色谱分离枳壳中化合物的方法，具体包括如下步骤：制备枳壳粗提取液、初步纯化、分离纯化黄酮类化合物、分离纯化香豆素类化合物。本发明利用高速逆流色谱技术从中药枳壳中分离、提纯得到五种黄酮类化合物和三种香豆素类化合物，并且得到的功能成分纯度高，有利于对中药枳壳的进一步研究；并且，本发明公开的分离、提纯方法简单，重复性好，可用于化合物的大量制备，具有优异的发展前景。

技术领域

本发明涉及天然产物活性成分的分离纯化技术领域，具体为一种利用高速逆流色谱分离枳壳中化合物的方法。

背景技术

枳壳(Fructusaurantii)是芸香科植物酸橙(CitrusaurantiumL)及其栽培变种的干燥未成熟果实,味苦、辛、酸，性微寒，归脾胃经，主治胸肋气滞、胀满疼痛、食积不化、痰饮内停及胃下垂等，是一种常用中药。现代研究表明，枳壳中主要含有黄酮类、香豆素、挥发油和少量生物碱等功能成分，是中药药效的物质基础，准确全面测定其含量是质量控制的关键。因此，如何快速、高效、稳定地从枳壳中分离出功能成分是枳壳现代化研究及质量控制的关键。

高速逆流色谱法是一种近年来快速发展的、连续高效的液液分配色谱技术，已在生物、医药、食品、材料等领域得到广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域倍受重视。

目前，本领域技术人员采用该技术从芸香科的不同植物中分离得到多个化合物。如“高速逆流色谱法分离制备化橘红中的柚皮苷、橙皮内酯水合物和异橙皮内酯.药物分析杂志，2011,31(5):831-834.”中公开了分别采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇、正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水、乙酸乙酯-正丁醇-水作为溶剂体系，从化橘红的石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物、正丁醇萃取物中分离得到异橙皮内酯、橙皮内酯水合物和柚皮苷；“高速逆流色谱分离制备陈皮中的黄酮类化合物.2009,2(27):244-247”中公开了采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂体系，从陈皮醇提取物中分离得到橙皮苷、桔皮素和5-羟基-6,7,8,3’，4’-五甲氧基黄酮；“高速逆流色谱分离制备广陈皮中多甲氧基黄酮类成分的研究.中草药,2010,1(41)：52-55.”中公开了采用石油醚-醋酸乙酯-甲醇-水为溶剂体系，从广陈皮乙酸乙酯萃取物中分离得到川陈皮素、3,5,6,7,8,3’，4’-七甲氧基黄酮及桔皮素；“高速逆流色谱分离制备橘皮中多甲氧基黄酮.中国食品学报,2015,6(15):117-122.”中公开了采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂体系，从橘皮石油醚提取物中分离得到川陈皮素、3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黄酮、橘红素和5-去甲基川陈皮素。但是，目前本领域技术人员从中药枳壳中仅获得四种黄酮类化合物如柚皮苷、新橙皮苷、川陈皮素和桔皮素，一种香豆素类化合物即水合橘皮内酯，对于枳壳中含有的功能成分没有进行完全的分离提纯，从而对于枳壳的进一步研究造成了限制。

因此，提供一种利用高速逆流色谱分离枳壳中化合物的方法，以实现从枳壳中分离得到更多的功能成分的技术效果，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种利用高速逆流色谱分离枳壳中化合物的方法，以实现从枳壳中分离得到更多黄酮类化合物以及香豆素类化合物的技术效果。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种利用高速逆流色谱分离枳壳中化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备枳壳粗提取液：由枳壳经过粉碎、乙醇浸提、减压浓缩制备得到枳壳粗提取液；

(2)初步纯化：利用大孔吸附树脂柱依次使用去离子水、质量浓度为70％的乙醇洗脱液和质量浓度为95％的乙醇洗脱液，对由步骤(1)制备得到的枳壳粗提取液进行洗脱处理，制备得到70％乙醇洗脱物和95％乙醇洗脱物；

(3)分离纯化70％乙醇洗脱物：利用高速逆流色谱对由步骤(2)制备得到的70％乙醇洗脱物进行分离提纯，得到三种黄酮类化合物和一种香豆素类化合物；