[发明专利]基于骨脱细胞支架的人多发性骨髓瘤微环境模型的构建方法

权利要求书

1.一种基于骨脱细胞支架的人多发性骨髓瘤微环境模型的构建方法，其特征是：包括下列步骤：

（1）骨脱细胞支架制备

无菌消毒后，取已处死大鼠的颅骨骨片后双蒸水冲洗，待骨片上无明显残余的血液后1% SDS+0.15%氨水洗脱液摇床震荡洗涤4周，每3天更换一次洗脱液，摇床速度为100转/分钟，双蒸水冲洗去除残余试剂，得到骨脱细胞支架；

（2）骨脱细胞支架脱细胞效果评价

对骨脱细胞支架进行DNA残余量检测、HE染色、超微结构观察评价；计算DNA含量=骨片DNA含量/骨片重量；DNA残余百分比=脱细胞骨片DNA含量/未脱细胞骨片DNA含量，要求DNA残余百分比小于等于5%；

（3）钴₆₀辐照灭菌

将干燥的脱细胞骨片进行钴₆₀辐照灭菌，完成灭菌后无菌条件下浸泡于含有10%胎牛血清的DMEM或1640完全培养基的24孔细胞培养板中12h；

（4）人多发性骨髓瘤细胞接种

将人多发性骨髓瘤细胞按照2×10⁴个/cm²的密度接种于骨片上，10%胎牛血清DMEM或1640完全培养基，37℃、5% CO₂条件下培养72h，建立得到基于骨脱细胞支架的人多发性骨髓瘤微环境模型；

所述的人多发性骨髓瘤细胞为悬浮细胞，包括U266、H929、RPMI8226、JJNK3、ARH-77、KMS-11的悬浮生长的人多发性骨髓瘤细胞株，接种密度为2×10⁴个/cm²。

2.根据权利要求1所述的基于骨脱细胞支架的人多发性骨髓瘤微环境模型的构建方法，其特征是：还对步骤（4）得到的基于骨脱细胞支架的人多发性骨髓瘤微环境模型进行模型评价，包括HE染色、DAPI染色、超微结构观察评价、CCK8法检测、细胞活力检测。

3.根据权利要求1所述的基于骨脱细胞支架的人多发性骨髓瘤微环境模型的构建方法，其特征是：钴60辐照灭菌剂量为6-12 kGy。