[发明专利]检测APC基因突变的引物以及试剂盒和方法

说明书

本发明涉及突变基因检测领域，具体而言，涉及检测检测APC基因突变的引物以及试剂盒和方法。检测APC基因突变的引物，包括以下引物对中的任意一对或多对；引物对1‑31的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1‑62所示。本发明提供的检测APC基因突变的引物，是经过多方面考虑设计，并经过筛选得到，该引物扩增的产物测序时，峰形整齐，峰图完整，质量高。通过对人们(特别是新生儿)进行APC基因检测，可以及早的发现具有致病基因的人群，为后期疾病的诊断和治疗提供科学依据，有助于早期采取措施防止息肉的增长，避免癌变的发生，有效降低家族性腺瘤性息肉病的癌变率。

技术领域

本发明涉及突变基因检测领域，具体而言，涉及检测检测APC基因突变的引物以及试剂盒和方法。

背景技术

家族性腺瘤性息肉病(fam ilial adenom atoμs polypo-sis,FAP)叫多发性息肉病，是一种常染色体显性遗传性疾病，该病的发生于结肠腺瘤性息肉病基因(adenomatoμspolyposis coli，APC)突变密切相关，超过80％的FAP患者可检测到APC基因突变。FAP全球发病率为出生婴儿的1/7000～1/10000。

FAP对性别影响相等，男女比例为1：1，大部分病例中都显示出高度的常染色体显性遗传，符合孟德尔遗传定律，外显率为70％至95％，散发病例约占1/3，成年的FAP患者都会存在父母的家族史，以及他们的子女有半数会患有FAP，且涉及好几代人。一般认为到40岁时或到了家系中最大患病年龄加上10岁的年龄时，未出现腺瘤者，即使有家族史，也不会再出现腺瘤。该病不存在地区和种族差异性，平均腺瘤发生年龄约为16岁，发生大肠癌年龄约为40岁。

APC基因，其编码区由16个外显子组成，编码一种约10.5kb的较大mRNA，表达一种2843个氨基酸的蛋白，分子量约300000道尔顿，APC蛋白具有肿瘤抑制作用，抑制多发息肉癌变的发生。APC基因的外显率高达100％，在子代遗传比约为50％，近些年，随着检测技术的提高，FAP的发病率呈上升趋势。在10％-30％无家族史的患者中有很高的新发生突变率。APC基因突变类型，主要有点突变和框架移码突变，前者包括无义突变、错位突变和拼接错误，后者包括缺失和插入。APC基因突变有720多种，这些突变遍及整个基因，60％以上的突变位于第16号外显子的5′端。其中密码子第1286～1513号之间的10％左右的编码区集中了约65％的体细胞突变，被称为突变密集区(MCR)。大部分突变属于错位突变，由缺失或1～8个碱基对的插入引起。大约95％的突变结果是在下游形成提前的终止密码子，使APC蛋白呈截短改变，这可能削弱了APC蛋白固有的抑制细胞增殖功能，从而导致APC蛋白功能的障碍。

目前国内外对FAP的诊断方法包括：1.直肠指检：由于FAP的息肉在直肠表现最多，故单纯的直肠指检可以为下一步的检查提供初步的诊断。2.电子肠镜和钡灌肠：可以了解病变的范围，并能取到活检，明确肿瘤性质。3.纤维胃镜和十二指肠镜检查：可以了解胃和十二指肠是否存在息肉。4.眼底镜检查：由于FAP多并存先天性视网膜色素上皮增生(CHRPE)，有高度的诊断敏感性和特异性，故眼底镜检查可列为家系中尚未出现大肠内腺瘤成员的筛查或诊断手段。X线、CT或MRI：可以了解骨瘤、中枢神经系统肿瘤等结肠外表现。这些临床检测的方法耗时长且繁琐，而且仅适用于已经出生的婴儿，对产前诊断无能为力。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供检测APC基因突变的引物，该引物扩增的产物测序时，峰形整齐，峰图完整，质量高。

本发明的第二目的在于提供检测APC基因突变的试剂盒，为APC基因突变的检测提供便利。

本发明的第三目的在于提供检测APC基因突变的方法，为家族性腺瘤性息肉病的诊断提供技术支持。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：