[发明专利]用于量化内源蛋白质致病聚集体的标准物

说明书

本发明涉及用于量化作为蛋白质聚集疾病、淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的特征的内源蛋白质致病聚集体或寡聚物的标准物，以及这些标准物用于量化这些致病聚集体或寡聚物的用途。

本分案申请是基于申请号为201280064164.X，申请日为2012年12月21日，发明名称为“用于量化内源蛋白质致病聚集体的标准物”的原始中国专利申请的分案申请。

本发明涉及用于量化作为蛋白质聚集疾病、淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的特征的内源蛋白质致病聚集体或寡聚物的标准物，以及这些标准物用于量化这些致病聚集体或寡聚物的用途。

蛋白质错误折叠疾病或蛋白质聚集疾病或淀粉样变性被描述为一种由不同种类组成的临床状态，其共同标准在许多情况(但不排除其它情况)下是各个特定蛋白质以β折叠结构的有序构象的细胞外全身性或局部沉积。阿尔茨海默病(AD,阿尔茨海默痴呆，拉丁语＝Morbus Alzheimer)或帕金森氏病也落在该组之中。由年龄决定的痴呆是当今社会中一个越来越大的问题，这是因为由于提高的预期寿命，越来越多的人遭受其苦并因此对社会保险系统和其可资助性产生影响。

内源蛋白质病理学聚集体，例如寡聚物或纤丝，出现于许多神经变性疾病中。在阿尔茨海默痴呆的情况下，例如在大脑中发现β淀粉样肽沉积物(Aβ肽沉积物)和在帕金森氏病情况下，共核蛋白(Synuclein)沉积物。然而，β淀粉样肽沉积物(或斑点，由肽-纤丝构成)仅是过程的最后阶段，其以从来自APP(淀粉样前体蛋白)的单体β淀粉样肽的分裂开始，然后形成神经毒性的β淀粉样肽寡聚物并最后以斑点中的β淀粉样肽纤丝的沉积物结束。AD的主要病理学特征是由Aβ肽组成的老年斑或淀粉样斑的形成。此外，产生来自Tau蛋白的神经纤丝沉积物。Aβ肽的前体蛋白质，APP,定位于神经元的细胞膜中。通过蛋白质水解降解和可能地之后的修饰，由此产生不同长度和类型的Aβ片段，例如Aβ1-40、Aβ11-40、Aβ1-42、Aβ11-42或pyroGluAβ3-42、pyroGluAβ3-40。单体Aβ肽也在健康机体的整个一生期间都产生。

按照自1990年代的淀粉样蛋白级联假说，以斑点形式的Aβ沉积物是疾病症状的触发者。然而近年来，不同的研究表明，特别是小的、自由扩散的Aβ寡聚物具有最大的毒性，并且对AD的发生和进展负责。因此，Aβ肽的聚集体与AD发病机理直接相关。

然而目前，可靠的诊断在引人关注的临床症状出现以后才是可能的，在这种情况下，以最大90％的可靠性为出发点。目前存在的至今唯一可靠的诊断可能，直到患者死亡后通过大脑中各种不同改变的组织学检测。

因此，存在对用于鉴定和量化记录造成和/或作为蛋白质聚集疾病、淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的特征的内源蛋白质病理学聚集体或寡聚物的方法的需要。

迄今只描述了很少的用于表征和量化组织和体液中的造成蛋白质聚集疾病、淀粉样变性或蛋白质错误折叠疾病的内源蛋白质致病聚集体或寡聚物的方法。

为了发展此类方法，以及保证用此测定的结果的可比较性，需要准确定义的标准物，即准确经表征的(合成的)聚合物。为了作为标准物使用，这些必须以各种不同的大小和形式存在，然而其必须是准确定义的。

然而，肽的聚集由许多因素决定，例如温度、样品的盐含量、蛋白质的制备公司、纯度等。因此，通过单体肽的聚集制备作为标准物的聚合物对于测试发展和验证是难以再现的。

此外，例如迄今制备的Aβ寡聚物不是足够稳定的，即它不能确保在不同的时间点从制备物取出Aβ寡聚物的情况下，总是存在相同的Aβ聚集体种类。

迄今已知的寡聚物制备物通常由各种不同的中间形式组成，其具有不均一的大小，并且因此是不足以再现的。