[发明专利]一种提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法

说明书

本发明公开了一种提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法，其包括，在谷氨酸棒杆菌培养基中加入体积浓度为0.5％～10％的乙醇。本发明显著提高了谷氨酸棒状杆菌的生长和蛋白表达产量，本发明方法绿色环保无毒害、操作简单、成本低、效果好、显著提高谷氨酸棒杆菌的蛋白表达产量，具有巨大的工业应用价值。本发明在培养基中添加1％乙醇促进谷氨酸棒杆菌的生长，同样培养条件下，谷氨酸棒杆菌的重组蛋白表达量提高一倍以上。

技术领域

本发明属于基因工程和代谢工程技术领域，具体涉及一种提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法。

背景技术

谷氨酸棒杆菌是一种非致病的革兰氏阳性菌，广泛用于工业生产高级醇、氨基酸、有机酸等工业产品；谷氨酸棒杆菌的基因组数据和注释在2003年完成，为该表达系统的优化提供了新的思路和支撑。日本Ajinomoto公司从上世纪90年代末就开始研究谷氨酸外源表达系统，近10年来已经有多种真核和原核蛋白在谷氨酸棒杆菌中高效表达，例如：胰岛素、人源Fab抗体片段等。作为一种外源表达蛋白表达宿主与大肠杆菌相比，谷氨酸棒杆菌具有一些特别的优势，如无内毒素、蛋白分泌能力强等；但是谷氨酸棒杆菌表达系统表达效率明显低于大肠杆菌。在谷氨酸棒杆菌表达系统中，目前用于工业生产表达蛋白的谷氨酸棒杆菌主要通过传统诱变或基因工程的方法获得，但这些方式主要通过改造宿主菌株来提高产量，很难做到普适性；而且很多操作局限于实验室而无法大规模应用。

因此，如何寻找一种能够提高谷氨酸棒杆菌外源蛋白表达量的方法是本领域有待解决的技术问题。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。

因此，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法，其特征在于：包括，在谷氨酸棒杆菌培养基中加入体积浓度为0.5％～10％的乙醇。

作为本发明所述的提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法的一种优选方案：在谷氨酸棒杆菌培养基中加入体积浓度为0.5％～3％的乙醇。

作为本发明所述的提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法的一种优选方案：所述重组蛋白，包括由含有Ptac启动子、Ptrc启动子、Plac启动子、Paph启动子、Pgro启动子的质粒载体所表达的重组蛋白。

作为本发明所述的提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法的一种优选方案：所述质粒载体，包括pXMJ19、pEC-XK99E、pDXW-8、pDXW-9。

作为本发明所述的提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法的一种优选方案：所述重组蛋白包括增强型绿色荧光蛋白、淀粉酶α、脑钠肽、VHH、ScFV。

作为本发明所述的提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法的一种优选方案：所述培养基，包括LB培养基、LBB培养基、LBG培养基、TBSB培养基、LBHIS培养基、BHI培养基。

作为本发明所述的提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法的一种优选方案：培养所述谷氨酸棒杆菌时，培养温度为30℃，摇床转速为200r/min。

作为本发明所述的提高谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达量的方法的一种优选方案：所述重组蛋白，包括由含有异柠檬酸裂合酶编码基因的启动子的质粒载体所表达的重组蛋白。