[发明专利]用于肿瘤化疗与光热联合治疗的pH/还原双重敏感多功能纳米胶束及其应用

权利要求书

1.一种用于肿瘤化疗与光热联合治疗的pH/还原双重敏感多功能纳米胶束，其特征在于，它是以具有pH敏感特性的PCL-acetal-PEG聚合物、具有还原敏感特性的PCL-ss-PEG-ss-PCL聚合物和具有活性基团的磷脂DSPE-PEG-NH₂为原料共混后自组装制备出具有pH/还原智能响应性的聚合物纳米胶束为载体，化疗药物与光敏剂包载于胶束的疏水性内核，外壳为亲水性PEG，具有长循环和空间稳定特性，叶酸靶向基团通过共价键修饰于胶束表面；其中，载药量为4-10%，化疗药物与光敏剂的质量比为0.5-2；粒径在200 nm以下；

PCL-ss-PEG-ss-PCL化学式：

其中，m=136-182，n=26-35

PCL-acetal-PEG化学式：

其中，m=1-30，n=1-25，p=1-15；

制备方法为：

将PCL-ss-PEG-ss-PCL与PCL-acetal-PEG溶于有机溶剂中，再将DSPE-PEG-NH₂、化疗药物与光敏剂加入共混，旋蒸除去有机溶剂铺膜，用磷酸盐缓冲溶液（PBS）分散，水化，至室温，冰浴下超声，得到胶束分散液放置于PBS透析，除去游离药物，得到靶向共负载化疗药物及光敏剂的pH/还原聚合物胶束分散液；然后再通过EDC/NHS反应连接叶酸靶向分子。

2.按照权利要求1所述的多功能纳米胶束，其特征在于所述的化疗药物为阿霉素、柔红霉素、阿柔比星、伊达比星、戊柔比星、紫杉醇、或米托蒽醌，或它们的组合；所述的光敏剂为吲哚菁绿（ICG）或是二氢卟吩（Chlorin e6）。

3.按照权利要求1所述的多功能纳米胶束，其特征在于所述的PCL-ss-PEG-ss-PCL共聚物分子量为12000-16000，其中PEG亲水链段质量百分数>45%，PCL-acetal-PEG分子量为9000-36000，具有活性基团的功能化磷脂DSPE-PEG-NH₂的PEG分子量为2000或5000；

所述功能化磷脂DSPE-PEG-NH₂可用马来酰亚胺化的功能化磷脂DSPE-PEG-Mal替换，然后连接巯基化的单克隆抗体anti-Her2-Fab、多肽LHRH作为靶向基团。

4.权利要求1所述的用于肿瘤化疗与光热联合治疗的pH/还原双重敏感多功能纳米胶束的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1）将两亲性共聚物PCL-ss-PEG-ss-PCL与PCL-acetal-PEG以 1:1充分共溶于二氯甲烷或甲醇与二氯甲烷的混合1:1有机溶剂中，用旋转蒸发仪除去有机溶剂，使之在茄形瓶内壁形成一层均匀的薄膜，真空干燥12-20小时；

2）向茄形瓶中加入pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液（PBS），摇晃使薄膜分散在溶液中，于60-65℃水化1-5h后，混匀，放置至室温，冰浴下超声，得到稳定、均匀的空白pH/还原双重敏感聚合物胶束分散液；

3）制备叶酸靶向共负载化疗药物及光敏剂的聚合物胶束则在铺膜时，将0.5%-5%（质量百分比）DSPE-PEG-NH₂、脱盐转疏水的DOX、转疏水的ICG与载体材料共混于有机溶剂中铺膜；得到胶束分散液后移入MWCO 8000-14000 Da的透析袋中，放置于PBS（pH7.4）中透析2-4小时，除去游离药物和转疏水所产生的盐溶液，得到透析后的靶向共负载化疗药物及光敏剂的pH/还原聚合物胶束分散液，得到氨基化的纳米粒；

4）通过EDC/NHS反应连接叶酸靶向分子，具体反应步骤为：称取摩尔比约为DSPE-PEG-NH2的5倍的叶酸，溶于去离子水中；加入摩尔比约为叶酸10倍的EDC及摩尔比为EDC 2倍的NHS活化15min；加入上述氨基化的纳米粒中，于室温磁力搅拌下反应8小时。

5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于所述水化溶液是生理盐水或pH 7.4 磷酸盐缓冲溶液和去离子水；水化体积（mL）与载体材料质量（mg）比在1:4-1:20之间。

6.按照权利要求4所述的方法，其特征在于所述化疗药物为阿霉素。