[发明专利]一种利用细菌纤维素压电水凝胶诱导干细胞分化的方法

权利要求书

1.一种利用细菌纤维素压电水凝胶诱导干细胞向神经或胶质细胞分化的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)将片状细菌纤维素水凝胶用1%～10%的SDS去离子水溶液在30℃～180℃下处理1h～24h，并在1%～10%的NaOH去离子水溶液中于40℃～160℃下处理1h～8h；然后用去离子水充分浸泡清洗，将清洗后的片状细菌纤维素水凝胶剪成0.5×0.5cm²～2×2cm²的小片备用；

(2)将片状细菌纤维素水凝胶小片放置于孔板中，加入75%酒精并在其中浸泡12h～48h，同时在无菌操作台中用紫外灯照射30min～180min进行灭菌消毒，用PBS将片状细菌纤维素水凝胶小片上的酒精洗净备用；

(3)将培养在细胞培养瓶中的干细胞进行消化后用细胞培养基分散得到干细胞悬液，将体积为0.01ml～5ml，细胞个数为2×10³～1×10⁶个的细胞悬液接种在孔板中的片状细菌纤维素水凝胶表面，静置10min～120min后，在孔板中补充0ml～5mL细胞培养基，将干细胞在片状细菌纤维素水凝胶衬底上培养，当不进行超声处理时，细菌纤维素压电水凝胶诱导干细胞向胶质细胞分化；当每天超声处理30min～60min时，细菌纤维素压电水凝胶诱导干细胞向神经细胞分化；且每2天更换一次细胞培养基；

(4)培养1天～90天后，检测细胞内与神经分化相关的特异性蛋白和基因Tuj1及GFAP的含量及表达水平；

步骤(1)所述片状细菌纤维素水凝胶作为细胞培养衬底，其厚度为0.1mm～5mm；

步骤(3)所述细胞培养基为低糖DMEM培养基+10%新生牛血清或胎牛血清+1%双抗；高糖DMEM培养基+10%新生牛血清或胎牛血清+1%双抗；或α-DMEM培养基+10%新生牛血清或胎牛血清+1%双抗；

步骤(3)所述培养条件为37℃，含5% CO₂的水蒸气饱和的湿润环境。

2.根据权利要求1所述的一种利用细菌纤维素压电水凝胶诱导干细胞向神经或胶质细胞分化的方法，其特征在于，步骤(2)所述孔板为48孔板、24孔板、12孔板或6孔板。

3.根据权利要求1所述的一种利用细菌纤维素压电水凝胶诱导干细胞向神经或胶质细胞分化的方法，其特征在于，步骤(3)所述干细胞为骨髓间充质干细胞、脂肪来源间充质干细胞或牙髓间充质干细胞。