[发明专利]一种耐盐促生菌菌株、筛选方法及应用

说明书

本发明一种耐盐促生菌菌株、筛选方法及应用，从盐碱地土壤中筛选到耐盐促生菌菌株，对该菌株的遗传特性和生理生化特性进行测定，确定该菌株为巨大芽孢杆菌B7，2018年5月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，对其进行耐盐度分析、对盐胁迫条件下的黄瓜种子发芽及盆栽实验中对黄瓜的耐盐促生作用进行测试。本发明提供的耐盐促生菌菌株、筛选方法及应用，巨大芽孢杆菌B7的耐盐度为0～8%，同时具有产IAA、产ACC脱氨酶、产氨气、固氮和解磷等多种促生特性，利用巨大芽孢杆菌菌液能在盐胁迫下显著提高黄瓜耐盐促生能力，减缓盐害现象、增加生物量，减少化学肥料的使用，并可用于制备菌液，用于在盐胁迫中促进作物发芽和生长。

技术领域

本发明属于微生物分离和应用技术领域，具体涉及一种耐盐促生菌菌株、 筛选方法及应用。

背景技术

目前，随着社会发展和人口增加，对耕地资源的需求也越来越多。土壤盐 渍化是指土壤底层或地下水的盐分随毛管水上升到地表，水分蒸发后，使盐分 积累在表层土壤中的过程。易溶性盐分在土壤表层积累的现象或过程，也称盐 碱化。除在滨海地区，由于受海水浸渍影响而发生盐碱化外，干旱和半干旱地 区因设施农业也是引起的土壤次生盐渍化的重要原因。土壤盐碱化是当前威胁 全球农业生产和农作物产量的主要非生物胁迫因子之一。目前全球有50％的灌 溉土地都受到不同程度的盐胁迫，中国盐渍土或称盐碱土的分布范围广、面积 大、类型多，总面积约1亿hm²，而且威胁面积逐年增加。如何改良和利用大面积盐渍化土地以及保护并提高重要的经济作物抵抗盐胁迫是当今国际社会亟 待解决的重要科技问题。

目前，主要生物改良方法是培育并种植耐盐碱作物，如种植高粱、甜菜、 向日葵以及柽柳、沙蓬草、紫穗槐等耐盐植物，此外还有针对耐盐转基因植物 的研究，但该类方法通常耗费周期长，花费巨大，而且植物转基因方法还未被 社会广泛接受和认可。

根际微生物是指在植物根系土壤范围内生长繁殖细菌、放线菌、真菌等微 生物。大多数根际微生物对植物无害且对植物生长有促进作用，这些根际微生 物具有固氮、溶磷、产生植物生长激素、铁载体以及诱导植物抗性的功能，利 用根际微生物提高盐碱地作物耐盐促生的方法具有投资少、见效快、效益高等 特点，有关根际微生物耐盐促生的功能活性研究已经受到相关研究者的广泛关 注，但是关于盐碱地中微生物分离纯化技术仍不够成熟，稳定性差。

发明内容

发明目的：为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种耐盐促生菌菌 株、筛选方法及应用，可用于提高作物耐盐能力，同时可为耐盐基因的克隆及 转基因耐盐植物的构建奠定基础。

发明方案：为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

一种耐盐促生菌菌株，所述耐盐促生菌菌株的分类命名为巨大芽孢杆 菌B7Bacillus megaterium B7，保藏编号为：CCTCC NO：M 2018284，保 藏于中国典型培养物保藏中心，保藏单位代码：CCTCC，地址：中国，武汉， 武汉大学，湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏时间为：2018年5月 17日。

进一步的，所述巨大芽孢杆菌B7的16S rDNA核苷酸序列如序列表所示， 巨大芽孢杆菌B7呈革兰氏阳性，吲哚反应阳性，菌落为白色、边缘整齐，中 间隆起，表面光滑湿润，不透明，直径为2～3mm，好氧，化能异养。

进一步的，包括以下步骤：

步骤一、耐盐促生菌菌株的分离和筛选

从江苏盐城沿海滩涂的盐碱地土壤采集土样，称取适量土样悬浮于无菌水 中，稀释到一定倍数后，取相同量土壤稀释液，分别涂布于不同NaCl浓度的 NA培养基平板上进行逐级筛选培养，于29℃～31℃培养2～3d，观察不同盐 浓度下菌株的生产情况，并对筛选出的生长良好的菌株进行反复平板划线纯化， 得到单一菌落的耐盐促生菌菌株；

步骤二、耐盐促生菌菌株的鉴定