[发明专利]绿豆抗豆象基因VrPGIP等位基因VrPGIP1-ACC41

说明书

本发明公开了一种绿豆抗豆象基因VrPGIP等位基因VrPGIP1^‑ACC41、分子标记及应用。基因序列为：编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的蛋白质的核苷酸序列；或上述核苷酸序列经取代、缺失和/或增加核苷酸且表达相同功能蛋白质的核苷酸；或在严格条件下与上述核苷酸序列杂交且表达相同功能蛋白质的核苷酸；或与上述核苷酸序列具有90％以上同源性且表达相同功能蛋白质的核苷酸。所述分子标记包含所述基因第373bp、第385bp、第562bp和第1006bp处的多态性位点。本发明获得了新的绿豆抗豆象基因及其分子标记，提供了新的基因资源，对绿豆抗豆象育种工作具有重要意义。

技术领域

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，尤其涉及一种绿豆抗豆象基因 VrPGIP1等位基因VrPGIP1^-ACC41、分子标记及应用。

背景技术

绿豆(Vigna radiata(Linn.)Wilczek.)，在中国已有两千年的栽培史，其种子含有非富的维生素和微量元素，具有重要的营养价值和医用价值。近年来，随着种植业结构的调整和人们膳食结构的改变，人们对绿豆的需求量日益增加，种植面积逐年扩大。豆象是绿豆的一大虫害，经豆象侵食的绿豆种子基本上失去了其经济价值。鉴于此，选育具有抗豆象能力的绿豆品种对绿豆的生产具有十分重要的意义。

发明内容

发明目的：为解决现有技术中的问题，本发明的目的之一是提供一种绿豆抗豆象基因VrPGIP1^-ACC41等位基因、编码蛋白、表达盒、表达载体、克隆载体或工程菌及应用。本发明的目的之二是提供一种与绿豆抗豆象性状相关的分子标记及应用。

技术方案：本发明所述的绿豆抗豆象基因VrPGIP1等位基因VrPGIP1^-ACC41，来自绿豆抗豆象品种ACC41，基因VrPGIP1^-ACC41的序列为：

i)编码如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的蛋白质的核苷酸序列；

或ii)由i)的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；

或iii)在严格条件下与i)的核苷酸序列杂交且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；

或iv)与i)、ii)或iii)的核苷酸序列具有90％以上同源性且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列。

iii)中，所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC 溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜。

进一步的，基因VrPGIP1^-ACC41的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

原产于澳大利亚的抗豆象野生绿豆ACC41经过人工接种绿豆象 (Callosobruchuschinensis)和四纹豆象(Callosobruchus maculatus)，结果表明 ACC41高抗C.chinensis和C.maculatus，而对照品种KPS2高感绿豆象和四纹豆象。为了明确绿豆抗豆象品种ACC41的抗豆象基因，本发明对绿豆ACC41的抗豆象基因VrPGIP1进行了克隆和测序。与感豆象品种KPS2相比，抗豆象绿豆品种ACC41在基因VrPGIP1的第373bp处(G替换为C)、第385bp处(T替换为A)、第453bp处(C替换为T)、第562bp处(G替换为T)和第1006bp处(A 替换为G)，导致翻译过程中造成VrPGIP1蛋白第125位(谷氨酸变为谷氨酰胺)、 129位(苯丙氨酸变为异亮氨酸)、188位(丙氨酸变为丝氨酸)和336位(赖氨酸变为谷氨酸)发生变化，从而引起蛋白功能的变化。

本发明还提供了一种表达盒、表达载体、克隆载体或工程菌，其包括包含基因VrPGIP1^-ACC41序列的核酸。