[发明专利]环磷腺苷注射剂中环磷腺苷含量的直接荧光光谱检测方法

说明书

本发明公开了一种环磷腺苷注射剂中环磷腺苷含量的直接荧光光谱检测方法，其采用超纯水或二次蒸馏水作为溶剂配制多组不同浓度的环磷腺苷标准溶液，并用B‑R缓冲溶液调节溶液的pH值为2，将溶液加热至50摄氏度，冷却至室温，并置于荧光分光光度计上，进行荧光光谱分析，绘出发射强度对环磷腺苷浓度的工作曲线；移取待测样品环磷腺苷注射液，稀释10000倍，并用B‑R缓冲溶液调节溶液的pH值为2，以285nm为激发波长，激发狭缝为5nm，发射狭缝为10nm，在290nm～550nm扫描范围内进行荧光光谱分析，根据待测样品的荧光发射强度，利用工作曲线求出待测样品中环磷腺苷注的浓度。本发明的检测方法具有准确性好、成本低、操作方便、环保的优点。

技术领域

本发明涉及一种环磷腺苷注射剂中环磷腺苷含量的直接荧光光谱检测方法。

背景技术

环磷腺苷(Cyclic Adenosine monophosphate，cAMP)为6-氨基-9-β-D-呋喃核糖基-9H-嘌呤-4`,5`-环磷酸氢酯，别名环化腺苷酸(见图1)。环磷腺苷是在人体内广泛存在具有生理活性的一种重要物质，作为参与调节细胞功能的第二信使物质，在临床上应用广泛。

环磷腺苷作为蛋白激酶致活剂，属于核苷酸的衍生物，是由三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)通过腺苷酸环化酶(adenylate cyclases，AC)催化下反应生成，对于多种体内功能活动均起到调节作用^[1-2]。近期研究证明了信号分子cAMP对于调节机体整体活动的协调性和精确性等方面起的主要作用^[3-4]。因此，对cAMP含量的准确检测方法的研究具有重大意义。

早前运用较广泛的是Gilman的蛋白结合检测法^[5]和免疫检测法^[6]，但是操作耗时且成本较高。其他生物荧光方法能较好地追踪活体细胞中cAMP的变化^[7]，但是操作过程显得相对复杂，难以推广。盛国荣等虽然采用了计算分光光度法建立复方环磷腺苷中环乳膏的质量控制标准^[8]，测定了其中环磷腺苷和维A酸的含量，但需要进行复杂的计算分离过程，线性范围较窄。高效液相色谱作为灵敏的药物分析检测手段被收录在《中国药典》(2015版)中^[9]，运用该方法对环磷腺苷的药理和含量检测的研究也常见报道^[10-13]。但是，涉及到色谱条件的优化步骤较为繁琐，需要严格的对照样品才能准确定性，而且昂贵的仪器使其无法广泛普及。

鉴于此，本发明人对上述问题进行深入的研究，遂有本案产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种准确性好、成本低、操作方便、环保的检测方法，用于检测环磷腺苷注射剂中环磷腺苷的含量。

为了达到上述目的，本发明采用这样的技术方案：

环磷腺苷注射剂中环磷腺苷含量的直接荧光光谱检测方法，采用超纯水或二次蒸馏水作为溶剂配制多组不同浓度的环磷腺苷标准溶液，并用B-R缓冲溶液调节溶液的pH值为2，将溶液加热至50摄氏度，冷却至室温，并置于荧光分光光度计上，以285nm为激发波长，激发狭缝为5nm，发射狭缝为10nm，在290nm～550nm扫描范围内进行荧光光谱分析，绘出发射强度对环磷腺苷浓度的工作曲线；移取待测样品环磷腺苷注射液，稀释200倍，并用B-R缓冲溶液调节溶液的pH值为2，以285nm为激发波长，激发狭缝为5nm，发射狭缝为10nm，在290nm～550nm扫描范围内进行荧光光谱分析，根据待测样品的荧光发射强度，利用工作曲线求出待测样品中环磷腺苷注的浓度，再求出环磷腺苷注射剂中环磷腺苷含量。