[发明专利]快速制备硬组织切片的方法及其应用

权利要求书

1.一种快速制备硬组织切片的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将硬组织在多聚甲醛中固定，硬组织在多聚甲醛中固定后，首先在10-20%（w/v）的蔗糖水溶液中浸泡1h，然后在体积分数为30%（w/v）的蔗糖水溶液中浸泡12-24 h；

（2）使用包埋剂包埋经过步骤（1）处理的硬组织，然后进行速冻，使得包埋剂固化；

（3）将经步骤（2）处理的样本的一侧紧密地粘贴至粘附膜带上，然后在-25℃ ~ -30℃下沿与粘附膜带的表面相平行的方向对硬组织进行切片，切片厚度为6-8μm，得到带有硬组织切片的膜带；

（4）将所述带有硬组织切片的膜带置于防脱载玻片上，所述防脱载玻片上带有紫外固化胶，所述带有硬组织切片的膜带上的硬组织切片通过所述紫外固化胶与所述防脱载玻片紧密贴合，然后用紫外光引发所述紫外固化胶聚合，去除硬组织切片表面的粘附膜带，得到所述硬组织切片。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（1）中，所述硬组织为骨组织。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（2）中，所述包埋剂为OCT包埋剂、TBS冰冻切片包埋剂或冷冻凝胶冰冻切片包埋剂。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（2）中，采用液氮进行速冻。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（3）中，采用冰冻切片机进行切片。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤（4）中，使用紫外灯发出的紫外光引发所述紫外固化胶聚合，紫外照射的时间为30-60秒。

7.一种权利要求1-6中任一项所述的方法所制备的硬组织切片。

8.权利要求1-6中任一项所述的方法所制备的硬组织切片在组织染色中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述硬组织切片用于Von Kossa染色、钙黄绿素荧光双标、免疫组化染色、碱性磷酸酶染色或抗酒石酸酸性磷酸酶染色。