[发明专利]接头组合物及其应用

权利要求书

1.一种接头组合物，其特征在于，包括：

第一接头；以及

第二接头，其中，所述第一接头的3’末端序列与所述第二接头的5’末端序列在所述第一接头和所述第二接头自连时形成限制性内切酶识别位点。

2.根据权利要求1所述的接头组合物，其特征在于，所述限制性内切酶识别位点为稀有限制性内切酶识别位点。

3.根据权利要求1所述的接头组合物，其特征在于，所述限制性内切酶识别位点的长度为不小于5nt。

4.根据权利要求1所述的接头组合物，其特征在于，所述限制性内切酶识别位点的长度为不小于6nt。

5.根据权利要求1所述的接头组合物，其特征在于，所述限制性内切酶识别位点为CCTAGG或CCUAGG。

6.根据权利要求1所述的接头组合物，其特征在于，所述限制性内切酶识别位点为AvrII识别位点。

7.根据权利要求1所述的接头组合物，其特征在于，所述第一接头的3’末端序列为CCT或者CCU，所述第二接头的5’末端序列为AGG。

8.根据权利要求1所述的接头组合物，其特征在于，所述第一接头的3’末端序列为CC，所述第二接头的5’末端序列为TAGG或UAGG。

9.根据权利要求1所述的接头组合物，其特征在于，所述第一接头的3’末端序列为CCTA或者CCUA，所述第二接头的5’末端序列为GG。

10.根据权利要求1所述的接头组合物，其特征在于，所述第一接头具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

11.根据权利要求1所述的接头组合物，其特征在于，所述第二接头具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

12.一种构建测序文库的方法，其特征在于，包括：

（1）将RNA样本与权利要求1~11任一项所述的接头组合物进行连接，以便获得连接产物；

（2）将所述连接产物进行反转录处理，以便获得反转录产物；

（3）将所述反转录产物进行酶切处理以便获得酶切处理产物，所述酶切处理是在限制性内切酶的作用下进行的，所述限制性内切酶特异性识别所述限制性内切酶识别位点；

（4）将所述酶切处理产物进行扩增反应，以便获得扩增产物，所述扩增产物构成所述测序文库。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述RNA样本中含有长度为18-30nt 的RNA分子。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述长度为18-30 nt的RNA分子是以小RNA的形式提供的。

15.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述扩增反应是PCR反应。

16.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述限制性内切酶具有RNA-DNA杂合链识别活性。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述限制性内切酶为AvrII。

18.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述酶切处理是采用AvrII在37°C的条件下进行30分钟。

19.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增中所利用的RNA PCR引物具有SEQ ID NO：3~4所示的核苷酸序列。