[发明专利]一种肝细胞癌辅助诊断或者疾病监测试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种肝细胞癌辅助诊断或者疾病监测试剂盒，试剂盒中包含原位杂交检测长链非编码RNA基因HCCL5表达的寡核苷酸探针。本发明为肝细胞癌的辅助诊断和疾病监测提供了强有力的分子生物学工具，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种肝细胞癌辅助诊断或者疾病监测试剂盒及应用。

背景技术

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一种常见的恶性肿瘤，据2012年报告估计在世界范围内，一年中新发癌症病例78.2万例(仅中国就占有50％)；肝细胞癌同时也是全球癌症死亡的第三大死因，2012年有近74.5万例患者死亡。尽管肝癌的患病率不断增加，但仍缺乏有效的治疗手段。同时，肝癌是一个具有毁灭性的疾病，发达国家和发展中国家的5年总体生存率(overall survival，OS)通常<20％；并且死亡率与发病率的比值为0.95，再次表明肝细胞癌患者的死亡极高而生存率低。肝细胞癌是一种临床预后极度不佳的致命性疾病，因此发现肝细胞癌诊断和疾病监测生物标志物是很有必要的。

长链非编码RNAs(long non-coding RNAs，lncRNAs)被广泛地描述为长度超过200个核苷酸(nucleotides，nt)的RNA分子，其具有许多mRNA的结构特征，包括含有poly(A)尾、5’-cap和promoter结构，而没有保守的开放阅读框。目前认为lncRNAs缺乏蛋白质编码能力，可以定位于细胞核和细胞质中。随着高通量测序和其他新兴研究技术的兴起，lncRNAs的生物学功能逐渐得到广泛了解。越来越多的证据表明，lncRNAs在广泛的细胞过程中起作用，包括细胞生长、细胞存活、细胞迁移、细胞侵袭和细胞分化等。总之，lncRNAs可为肿瘤的治疗提供新的靶点，也有望成为肿瘤诊断和疾病监测新的生物标志物。

肿瘤基因组及其相关数据库的发展给癌症研究者提供了极大的便利，大量的肿瘤基因信息和在线分析工具使得电子克隆(in silico cloning)成为筛选癌症相关新基因众多方法中性价比最高的一种。最近我们利用电子克隆技术结合cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends，RACE)，成功克隆和拼接获得一个肝细胞癌相关新基因及其全长，并使用生物信息学预测发现该基因是一个长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种肝细胞癌辅助诊断或者疾病监测试剂盒及应用。

发明人利用原位杂交的方法在肝细胞癌及癌旁组织中，检测了该长链非编码RNA的表达情况，结果显示lncRNA HCCL5(该长链非编码RNA基因HCCL5的序列如SEQ ID NO.4所示，将其在NCBI数据库中进行比对，发现其是在LOC105371083的基础上5’延长了86个核苷酸，3’增加了多聚A尾。)在肝细胞癌组织中的表达阳性率高于癌旁组织(p<0.05)。因此针对该lncRNA的检测试剂可用于肝细胞癌的辅助诊断。随后进一步扩大样本，采用原位杂交检测人肝癌组织及正常肝组织中lncRNA HCCL5的表达，结果显示，与Normal liver tissue组相比较，lncRNA HCCL5在Bile duct adenocarcinoma、Hepatocellular carcinoma及Metastatic adenocarcinoma中的表达阳性率显著增加，且呈现依次上升的趋势(p<0.05)。同时，与人肝细胞癌组织G1-2期相比，lncRNA HCCL5在人肝细胞癌组织G3期的表达阳性率增加。此外，与女性肝细胞癌组织相比，lncRNA HCCL5在男性肝细胞癌组织中的表达阳性率增加(p<0.05)，这与肝细胞癌在男性女性中的发病率比例基本一致。因此针对该lncRNA的检测试剂不仅可用于肝细胞癌的辅助诊断，且针对该lncRNA的检测试剂还可用于肝细胞癌的疾病监测。