[发明专利]一种用于木薯固氮的微杆菌的制备方法

权利要求书

1.一种用于木薯固氮的微杆菌的制备方法，其特征在于，所述一种用于木薯固氮的微杆菌为厚壁菌门Firmicutes；微杆菌属Microbacterium sp.，保藏编号为：CGMCCNo.12182，步骤为：

步骤一、样品选取：对木薯进行采样，选取木薯的根部未膨大的部分，选取一定长度的完整根部，直径为2-3mm；

步骤二、将采集的木薯根部按照根长分类，大致分为4类分别为5cm，10cm，15cm，20cm，用蒸馏水冲洗干净；将分类好的木薯根进行表面杀菌，将表面杀菌完成的木薯根用无菌水冲洗5遍，将最后一遍冲洗的无菌水涂布在LB培养基上，37℃培养36h，确定无菌水涂布的培养基上无菌体生长，证明根部外表面已充分灭菌干净不存在外源菌体，再将根部材料用于内生菌的筛选；

步骤三，将步骤二处理后消毒并冲洗干净的根放入研钵中研磨，加入10mL的无菌水后静置5min，取0.1mL的研磨液涂布在无氮固体培养基上，28℃培养5-7d；观察无氮固体培养基上的细菌生长状况，选取能够生长的并能够挑起的单个菌落进行划线培养；在无氮固体培养基上进行划线培养，传代三次后选取能够传代培养，并且可以划线分离的细菌进行后续试验；

步骤四、对所得内生固氮菌株进行总DNA提取，并以总DNA为模板，扩增16S rRNA基因序列，扩增产物测序后，结果在NCBI上进行比对。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤一中，采样选取苗期木薯。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤一中，选取木薯根部的长度在5cm以上。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤三中，无氮固体培养基的组成为：蔗糖10g，K₂HPO₄·H₂O 0.1g，MgSO₄·H₂O 0.2g，CaCl₂·H₂O 0.02g，Na₂MoO₄·H₂O 0.002g，Malic acid 5.0g，KH₂PO₄·H₂O 0.4g，NaCl 0.1g，FeCl₃0.01g，蒸馏水1000mL，pH7.0。