[发明专利]重组大鼠抗小鼠CD4单克隆抗体，制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种重组大鼠抗小鼠CD4单克隆抗体，制备方法和应用，包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，其中重链可变区含有CDR1、CDR2、CDR3，编码基因序列依次如SEQ ID NO.7～9，翻译氨基酸序列依次如SEQ ID NO.1～3所示，轻链可变区含有CDR1、CDR2、CDR3，编码基因序列依次如SEQ ID NO.10、11、12，翻译氨基酸序列依次如SEQ ID NO.4、5、6所示。该重组单抗结构明确、效价高、稳定性更好。

技术领域

本发明涉及生物工程方面单克隆抗体的制备技术领域，具体涉及一种重组大鼠抗小鼠CD4单克隆抗体，制备方法和应用。

背景技术

抗体是生物科学领域的主力，但是它的可靠性一再让研究人员处于窘境。如今，科研者最常遇到的问题主要有：购买的用于检测蛋白X的抗体优先与蛋白Y结合(甚至可能完全不与X结合)；可重复性差，用新抗体重复以前的实验，发现结果无法重复。一个好项目因此搁浅，抗体的不可靠性问题非常让人警醒。同一个抗体在几次平行实验里得出的结果不同，将会产生灾难性的结果，而导致这一结果却可能与抗体的生产过程有关。特异性不足、敏感度和批次差异性等导致了错误的科研发现和大量的科研精力浪费；抗体的不可靠性造成了癌症、代谢、老化、免疫学和细胞信号转导以及任何研究复杂的生物分子领域的巨大损失；因抗体而造成的在时间和资源方面的浪费非常巨大。

传统的抗体制备是通过免疫动物获得单克隆抗体和多克隆抗体，其中多克隆抗体是通过收集经过目标抗原刺激动物获得免疫后的血液而制成的(只要这只动物还活着，就能够一直提供多克隆抗体)；单克隆抗体是通过宿主动物接受目标蛋白免疫，然后提取出能识别并对该抗原发生响应的B细胞，使其与骨髓瘤细胞发生融合，从而成为可永久培养的细胞，不断产生目的抗体。

相比之下，重组抗体不同于传统的单克隆抗体，因为它们的制备只需要前期免疫动物甚至不需要动物参与。可通过检测产生该抗体的基因序列(通过对动物的免疫细胞进行测序、或自己设定序列，检测产生的蛋白是否符合目标蛋白)；再将该基因插入到合适的细胞株中，从而产生抗体。由于抗体是确定的，即使原始细胞株死亡或发生突变，也能通过基因插入，产生需要的细胞株。

越来越多的科学家认为，单克隆抗体和多克隆抗体最终会被“结构更明确”的重组抗体完全取代。许多蛋白质不能被现有的试剂识别，这是因为使用了结构不明确的多克隆抗体，而使用一些基因可识别或存储的试剂能够克服这一点。尽管多克隆抗体具有广泛可用性，是目前研发最便宜的抗体，适用于制备一些研究较少的抗体。但随着目标蛋白结构和功能的不断明确，以及临床转化的需求，重组克隆抗体也将大有可为。

小鼠基因结构、个体发生和发育过程、组织细胞结构和功能与人类相近，它在了解功能基因、疾病基因以及在整体生物水平上研究复杂的生命现象和未知基因的功能方面已成为重要的模式生物，在生物医学领域受到了广泛的应用。由于单抗制备技术的局限性，小鼠作为宿主动物对于自身蛋白存在耐受性，无法产生免疫应答而获得可以用于小鼠模型研究的工具抗体。尽管目前小鼠模型使用广泛，而缺乏针对小鼠的单抗给研究造成了很大困难。为了解决这个问题，本发明利用基因工程抗体技术制备重组大鼠抗小鼠CD4单克隆抗体，解决了传统单克隆抗体指标技术物种局限性，产量低及批量差大的问题。通过检测产生该抗体的基因序列，后将其插入到合适的细胞株中，从而产生抗体。该技术具备抗体结构更为明确，产量大，批间差小，单位生产成本低，可以广泛用于疾病模型研究，临床转化以及治疗等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组大鼠抗小鼠CD4单克隆抗体，制备方法和应用。该重组抗体结构明确、效价高、稳定性更好。

本发明提供的重组大鼠抗小鼠CD4单克隆抗体，包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，其重链可变区含有CDR1、CDR2、CDR3，其氨基酸序列依次如SEQ IDNO.1～3所示，轻链可变区含有CDR1、CDR2、CDR3，其氨基酸序列依次如SEQ ID NO.4、5、6所示。