[发明专利]紫花玉簪内生真菌代谢产物、医用生物活性及其应用

说明书

本发明涉及两株紫花玉簪内生真菌（HoV3、HoV7）的分离培养方法及其代谢产物对动物真菌性皮肤病抑制作用。该真菌分离自紫花玉簪，其代谢产物对犬小孢子菌(Sabouraudites lanosus)、石膏样小孢子菌(Microsporum gypseum)、须癣毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)3种动物病原菌具有良好抑菌活性。

技术领域

本发明属微生物技术领域，具体涉及内生真菌代谢产物在制备抗真菌药物的应用。

背景技术

紫花玉簪（Hosta ventricosa）属百合科（Liliacea）玉簪属（Hosta）多年生宿根草本植物，主要分布于海拔500～2400 m的亚洲温带，亚热带地区，原产于中国，韩国和日本。其全草均可入药，是一种蒙医药学传统常用药材，其中玉簪花主治疔疮，蛇虫伤等，玉簪叶主治咽喉疼痛，小便不适，烧伤等，玉簪根消除肿痛、解除毒素等。

据报道，玉簪花和根的提取物对供试动物病原菌有抑制作用。但直接从植物中提取抗菌剂成本高，植物内生真菌所产生代谢产物可以打破直接利用植物时存在的一些弊端，包括植物本身生长周期较长、产量有限、不能循环利用等限制。申请者根据宿主植物与其内微生物在长期共同生活而具有产生相同活相似次生代谢产物合成途径的“内共生理论”，从紫花玉簪中分离筛选到对2种对动物病原菌具有较好的抑菌活性的内生真菌，相关研究未见报道。

发明内容

本发明的目的是从紫花玉簪中分离筛选出有抑菌活性的内生真菌代谢产物，并将该代谢产物应用于治疗皮肤病害。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种具有抗真菌活性的紫花玉簪内生真菌发酵液提取物，其特征在于所述内生真菌发酵液提取物选自石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物之一，或其任意组合。

所述提取物是通过以下方法制备得到：（1）采集新鲜健康的紫花玉簪根部；

（2）将步骤（1）紫花玉簪根部组织表面消毒后，做超净工作台洁净度检查，漂洗液检查，植物组织印记法筛选无菌组织块；

（3）将步骤（2）的无菌组织于无菌工作台切成小块，置于PDA培养基中，于恒温真菌培养箱中倒置培养，待出现内生真菌菌丝沿组织切口向外生长时，采用尖端菌丝挑取法，挑取形态不同的菌落，经反复纯化后转接到PDA斜面培养基，即得紫花玉簪内生真菌；

（4）将新鲜马铃薯洗净去皮后切成小块，加蒸馏水煮沸，用纱布过滤，滤液中加入葡萄糖搅拌均匀，用蒸馏水稀释，分装、灭菌，制得液体发酵培养基；

（5）将步骤（4）液体发酵培养基分装在锥形瓶中，用打孔器将经步骤（3）分离纯化的内生真菌打成菌饼于锥形瓶中，进行培养，并将所培养得发酵液进行离心，取上清液，经微孔滤膜过滤，即得内生菌发酵液；

（6）取步骤（5）获得的内生菌发酵液，冷冻干燥后，用蒸馏水分散，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取，合并相同溶剂的萃取液，萃取液真空浓缩干燥，分别得到石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物。

一种药物组合物，其包括所述的内生真菌发酵液提取物以及药学上可接受的载体。

所述内生真菌发酵液提取物或所述药物组合物在制备抗真菌或防治真菌感染药物中的应用。

所述内生真菌发酵液提取物或所述药物组合物在制备防治皮肤病害药物中的应用。

所述内生真菌选自HoV3、HoV7或其组合。