[发明专利]一种单加氧酶复合体及其在手性亚砜合成中的应用

说明书

本发明涉及分子生物学领域的一种单加氧酶复合体，所述的单加氧酶蛋白复合体由四个亚基组成，其氨基酸残基序列如SEQ ID No.1所示。利用所述的单加氧酶复合体能制备高光学纯度的(R)构型亚砜。相对于其它现有的制备方法，使用所述制备方法反应时间短，反应条件温和，对环境友好，操作简便。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种单加氧酶复合体及其在手性亚砜合成中的应用。

背景技术

手性亚砜是一类非常重要的化合物，可作为手性中间体和辅剂、手性配体、催化剂以及临床药物，在有机合成和药物合成中有广泛的应用。现有的手性亚砜合成技术还存在着过度氧化、副产物多、反应条件苛刻等不足。生物酶的高效和高选择性，使得生物催化技术可望发展成为工业化绿色制备手性亚砜类药物的新途径。但现有研究表明，高活性和高对映选择性的手性亚砜合成酶还十分匮乏，无法满足绿色工业化生产的需求，获得高催化效率的生物酶和相应的生物催化合成方法，仍然是手性亚砜生物催化制备发展过程中的难点和瓶颈。

发明内容

本发明旨在克服上述缺点，提供一种高催化活性的单加氧酶复合体，以及该单加氧酶复合体在手性亚砜生物催化合成中的应用。

为了达到上述目的，本发明提供如下基础技术方案：单加氧酶复合体pmTod，包含4个亚基，命名为：pmTodA，pmTodB，pmTodC，pmTodD；四个所述亚基的氨基酸残基序列分别如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。

pmTod是该单加氧酶复合体的英文解释。

本发明所涉及的单加氧酶复合体(pmTod)是从实验室保存的菌种中分离获得，获得的方法为本领域常规方法；较佳地为从重组表达pmTod的基因工程菌中分离获得或者人工合成获得。

以下是对基础技术方案的优化：

优化方案一：所述单加氧酶复合体为具有催化硫醚底物生成(R)-亚砜的蛋白质。

优化方案二：包含上述基础方案或者优化方案一的单加氧酶复合体的蛋白质编码基因。

优化方案三，基于优化方案二：所述蛋白质编码基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示。

本发明所述的单加氧酶复合体pmTod基因是从本实验室保存的菌种中克隆获得，获得的方法为本领域常规；较佳地为提取菌株基因组DNA，通过PCR扩增获得，或者根据SEQID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示核苷酸序列人工合成获得。

优化方案四，包含优化方案二的蛋白质编码基因的重组表达载体。

优化方案五，包含优化方案三的蛋白质编码基因的重组表达载体。

本发明所述重组表达载体由通过本领域常规方法将所述pmTod基因连接于各种骨架载体上构建而成；较佳地，可通过下述方法制得：将通过PCR所得的pmTodA(SEQ ID No.1)和pmTodB(SEQ ID No.2)基因和骨架载体pET-Dute-1连接形成重组载体pETDute1-pmTodA-B，将通过PCR所得的pmTodC(SEQ ID No.3)和pmTodD(SEQ ID No.4)基因和骨架载体pRSF-Dute-1连接形成重组载体pRSFDute1-pmTodC-D。

优化方案六，包含优化方案四或优化方案五中所述重组载体的基因工程菌。