[发明专利]用于脆性X综合征致病基因检测的校准品及其应用

说明书

本发明公开了一种用于脆性X综合征致病基因检测的校准品及其应用，所述校准品中含有至少6个CGG序列重复数不同的FMR1基因片段。采用本发明的脆性X综合征致病基因检测校准品，应用荧光PCR‑毛细管电泳法对FMR1基因CGG重复数进行检测，利用校准品及检测的结果构建标准曲线，从而计算出同批次检测样本的CGG重复数，该方法显著提高了脆性X综合征致病基因检测的分辨度，使脆性X综合征的检测方法更为完善和准确。

技术领域

本发明涉及脆性X综合征基因检测技术领域，尤其是一种用于脆性X综合征致病基因检测的校准品及其应用。

背景技术

脆性X综合征是仅次于先天愚型的最常见的遗传性智力障碍类型，发病率为1/2500～1/5000，在我国智力低下患者中发病率约为6.3％。该病发病存在明显的性别差异，男性发病率较高，据统计，男性发病率为1:4000，女性发病率为1:8000～1:6000。其主要特征为中度至重度智力低下，且随着年龄增加病情有加重的趋势，其他临床表现为特殊面容，如长脸或招风耳，青春期以后出现大睾丸，许多患者还表现为冲动、多动、焦虑、恐惧社交、语言呆板等孤独症行为。FXS严重危害儿童生长发育，早发现、早治疗、早干预能显著改善患儿预后，且可为家系遗传提供产前遗传咨询，避免家族中再次出现同样的患者，对家庭幸福美满、社会人口素质提高有重大意义，具有不可估量的社会效益和经济效益。

脆性X综合征是X染色体DNA过度甲基化或完全改变所致的X连锁不完全显性遗传病。FXS的致病基因为脆性X智力低下1号基因(FMR1)，绝大部分FXS是由于FMR1的(CGG)n重复序列过度扩展导致基因甲基化而造成的，只有极少数病例是由FMR1基因点突变或者是完全缺失而造成。正常人的CGG重复数为6～44，最常见的是29次和30次，重复数为55～200的成为“前突变”，重复数超过200的为“全突变”，而重复数为45～54的为“灰色区域”，介于“前突变”和“正常”之间，没有临床表现。

现有的脆性X综合征检测方法采用PCR、MLPA、Southern Blot等技术。但这些还具有一定的缺陷，如操作难度高、检测耗时长、成本高等。除此之外，对FMR1基因CGG重复数的分辨度仍然不够。基于PCR技术扩增的FMR1基因目的片段，毛细管电泳检测扩增片段比传统的琼脂糖凝胶电泳分辨率更高，能够分辨3～8bp以上的不同长度PCR片段，但不同批次运行也会带来一定的误差。

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种用于脆性X综合征致病基因检测的校准品，采用该标准品能避免现有技术中脆性X综合征致病基因检测的低分辨度问题，使脆性X综合征的检测方法更为完善和准确。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案包括以下几个方面：

在第一个方面，本发明提供了一种用于脆性X综合征致病基因检测的校准品，所述校准品中含有至少6个CGG序列重复数不同的FMR1基因片段。

优选地，所述校准品中含有6个CGG序列重复数不同的FMR1基因片段。

优选地，所述6个不同的FMR1基因片段的CGG序列重复数分别为23、31、46、53、77、117，由此，所述6个CGG序列重复数覆盖了FMR1基因中正常型(CGG序列重复数6～54)以及CGG序列重复数≤117的前突变型(55～200)，同时校准品还可以检测出FMR1基因的CGG序列重复数117～200前突变型和>200的全突变型(CGG序列重复数>200)。

优选地，所述重复数23的FMR1基因片段长度为297.80～298.99bp，重复数31的FMR1基因片段长度为321.73～322.91bp，重复数46的FMR1基因片段长度为365.23～366.37bp，重复数53的FMR1基因片段长度为388.42～389.61bp，重复数77的FMR1基因片段长度为458.33～461.86bp，重复数117的FMR1基因片段长度为574.36～575.52bp。