[发明专利]一种用于烧烫伤的快速修复液及其制备方法

说明书

本发明涉及一种用于烧烫伤的快速修复液及其制备方法。使用常规分离获得的干细胞，经分子克隆技术“过表达”人纤维连接蛋白（fibronectin，FN），利用富含各种自分泌的细胞因子和过表达FN的该干细胞培养上清，应用于烧烫伤患者和久治不愈溃疡创面的修复治疗。该发明方法简便易行，适用于不同来源的干细胞培养上清的大规模生产。并将该类产品应用于烧烫伤患者和久治不愈溃疡创面的修复治疗。为干细胞应用于医学转化事业提供一条新的路径。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于烧烫伤的快速修复液及其制备方法。

背景技术

有研究报道，严重创伤、大面积烧伤、整形术后的创面覆盖已经成为了一个十分重要的问题，除了患者自体植皮外，人们采用过同种异体植皮，以及其他相关修复材料来覆盖创面，但是无论自体或异体皮肤移植均受到供体来源和免疫排斥反应的限制。亟待寻找一种理想的无排斥反应、促进皮肤损伤修复、促进皮肤再生的天然药物。

干细胞具有独特的分化潜能，能治愈组织难以自愈的创伤，能治疗临床上难以治愈的疾病，干细胞是一种具有自我复制功能和多分化潜能的早期未分化细胞，医学界称之为“万用细胞”。干细胞具有各种各样的生物学特性，最主要的是具有自我更新和多向分化潜能及无限增殖能力。干细胞还具有分泌多种细胞因子的能力，人表皮细胞生长因子(EGF)、人角质细胞生长因子（KGF）、人成纤维细胞生长因子（FGF）、人血小板样衍生生长因子（PDGF）、纤维连接蛋白（FN）等。

间充质干细胞 (mesenchymal stem cells，MSC) 是一组源于基质的异质细胞群，可以从人体大多数组织获取。大量实验研究显示，间充质干细胞具有表皮细胞分化潜能，可促进受创皮肤的愈合。骨髓源性间充质干细胞由于存在病毒污染的隐患，且随着供者年龄增长，其细胞数量和扩增、分化能力出现明显下降趋势，不适合批量制备。而表皮干细胞是存在于表皮基底层和毛囊根部之间的间隙中一种皮肤干细胞，作为皮肤组织的特异性干细胞，不仅能够维持皮肤新陈代谢的主要功能细胞，还与创面的修复紧密相关，在创面环境中分化为角质化细胞，转移至皮肤创面而修复皮肤创面。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种用于烧烫伤的快速修复液及其制备方法，该快速修复液能够促进表皮细胞生长，缩短创口愈合时间。使用常规分离获得的干细胞，经分子克隆技术“过表达”人纤维连接蛋白（fibronectin，FN）。利用富含各种自分泌的细胞因子和过表达FN的该干细胞培养上清，应用于烧烫伤患者和久治不愈溃疡创面的修复治疗。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种用于烧烫伤的快速修复液，包括含有表皮细胞生长因子、人角质细胞生长因子、人成纤维细胞生长因子、人血小板样衍生生长因子和纤维连接蛋白干细胞的培养上清液。

本发明所述培养上清液的浓度为大于或等于1×10¹⁰个/ml。

本发明提供一种用于烧烫伤的快速修复液在烧烫伤患者和久治不愈溃疡创面的修复治疗中的应用。

本发明提供一种用于烧烫伤的快速修复液在外伤创面、预防疤痕的形成中的应用。

本发明提供一种用于烧烫伤的快速修复液的制备方法，包括以下步骤：

⑴、常规间充质干细胞的分离，获取间充质干细胞；

⑵、利用分子克隆技术，将纤维连接蛋白基因导入步骤⑴获得的间充质干细胞进行过表达；按实验室常规步骤⑴中获得的脐带间充质干细胞进行转染；次日，换新鲜的含800μg/mlG418的opti-MEM换液，继续培养一周；

⑶、收集细胞培养上清，并检测其培养上清液中纤维连接蛋白的表达情况；包括以下步骤：

①将细胞扩增传代至大约二十代后，细胞数量≥10¹⁰；

②换成新鲜的无血清干细胞培养基，继续培养3天；