[发明专利]一种基于溶酪大球菌平板凝集试验抗原组成的试剂盒、制备方法及其应用

说明书

本发明涉及一种基于溶酪大球菌平板凝集试验抗原组成的试剂盒、制备方法及其应用，所述试剂盒中包括：(1)溶酪大球菌平板凝集试验抗原；(2)标准阳性血清；(3)标准阴性血清；本发明试剂盒操作简单方便，可用来检测溶酪大球菌血清抗体，适合在各基层兽医有关单位以及养殖场广泛推广使用；本发明中的试剂盒在检测样品时只需要使用几种简单耗材，不需要任何其它设备，即使在条件比较简陋的养殖场也可以使用；结果判定直观，眼观即可；操作人员不需要专业知识，不必接受专业培训，只参照说明书就可进行检测；成本低廉，经济实惠，使用者均可接受。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于溶酪大球菌平板凝集试验抗原组成的试剂盒、制备方法及其应用。

背景技术

溶酪大球菌(Macrococcus caseolyticus)属于巨球菌属，该属包括7个菌种，溶酪大球菌是其中的代表菌种。该菌可特异性的从动物皮和动物类食品中分离到，比如牛乳、生牛肉、鸡肉、火腿等，我国传统肉制品广式腊肠中也能分离到；该菌可引起鱼发病，已从牙鲆、鲭鱼、加州鲈等鱼体内分离到，给水产养殖带来了危害；另外，溶酪大球菌还可以使犬发病，表现鼻炎的症状。该菌还携带耐甲氧西林的SCCmec原件(mecB～carrying SCCmecelement)，表现对青霉素类药物高度耐药。

目前国内外对溶酪大球菌的研究报道甚少，GenBank基因库中仅有一株溶酪大球菌的全序列，对于溶酪大球菌的分子生物学检测技术报道的非常少，对于溶酪大球菌的血清抗体检测技术在国内外均未见报道，更没有一种实现商品化的检测溶酪大球菌血清抗体的抗原。鉴于此，有必要开发一种可检测溶酪大球菌血清抗体的抗原及其对应的试剂盒，用来对溶酪大球菌的感染状况进行调查。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种基于溶酪大球菌平板凝集试验抗原组成的试剂盒及其制备方法。

本发明的另一目的是提供一种基于溶酪大球菌平板凝集试验抗原组成的试剂盒在检测溶酪大球菌血清抗体中的应用。

本发明的另一目的是提供一种溶酪大球菌平板凝集试验抗原检测血清抗体的方法。

本发明所采用的技术方案为：一种基于溶酪大球菌平板凝集试验抗原组成的试剂盒，所述试剂盒包括：(1)溶酪大球菌平板凝集试验抗原；(2)标准阳性血清；(3)标准阴性血清。

一种基于溶酪大球菌平板凝集试验抗原组成的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

步骤A、溶酪大球菌平板凝集试验抗原的制备：将溶酪大球菌菌株进行增菌培养后，进行水浴加热灭活，再离心取沉淀，用5g/L石炭酸生理盐水悬浮得到；

步骤B、标准阳性血清的制备：取溶酪大球菌进行增菌培养后，离心取沉淀，进行水浴灭活，与弗氏完全佐剂混匀，免疫未感染过溶酪大球菌的健康鸭，从鸭翅静脉采血分离血清，用琼脂扩散试验检测抗体效价，效价达1:32以上即为标准阳性血清；

步骤C、标准阴性血清的制备：取健康鸭的颈动脉血，收集至大离心管中，室温过夜，离心，取上清，经琼脂扩散试验检测，溶酪大球菌血清抗体为阴性，即得到标准阴性血清；

步骤D、将上述制备的溶酪大球菌平板凝集试验抗原、标准阳性血清、标准阴性血清组装成基于溶酪大球菌平板凝集试验抗原组成的试剂盒。

进一步地，所述步骤A中制备溶酪大球菌平板凝集试验抗原的溶酪大球菌菌株保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC No:M 2018116。

一种溶酪大球菌平板凝集试验抗原检测血清抗体的方法，包括如下步骤：

步骤一、取出4℃保存的溶酪大球菌平板凝集试验抗原，恢复至室温，充分摇匀；

步骤二、在玻璃板上分别滴加待检血清、标准阳性血清、标准阴性血清各25ul；