[发明专利]获得性细胞克隆的检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明涉及一种用于原发性肿瘤治疗后检测用的获得性细胞克隆的检测试剂盒及其使用方法。该获得性细胞克隆的检测试剂盒包括第一荧光探针试剂、第二荧光探针试剂及第三荧光探针试剂；其中，第一荧光探针试剂中两条检测探针的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，第二荧光探针试剂中两条检测探针的序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示，第三荧光探针试剂中检测探针的序列如SEQ ID NO:5所示。该获得性细胞克隆的检测试剂盒及其使用方法可用于对骨髓样本的ACC情况，尤其是SACC情况进行检测和随访跟踪，检测结果可以结合临床性指标、病理性指标、流式分型指标，为tMDS和tAML的临床早期诊断提供重要依据和参考，更好地指导临床医生对治疗相关性骨髓瘤进行早期诊断干预和治疗。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其是涉及一种获得性细胞克隆的检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

原发性肿瘤的传统治疗方法主要分为放疗、化疗或者两者一起，而化疗又主要包括烷化剂疗法、嘌呤类似物疗法、蒽醌疗法、利妥昔单抗疗法等。传统的治疗往往会对病人正常细胞产生毒性作用而造成严重的损害，易导致治疗相关性髓细胞瘤(therapy-relatedmyeloid neoplasm，tMN)的发生，如治疗相关性骨髓增生异常综合征(therapy-relatedmyelodysplastic syndrome，tMDS)和治疗相关性急性髓细胞白血病(therapy-relatedacute myeloid leukemia，tAML)，一般发生于原发性肿瘤治疗后10年内，中位期为5-7年，根据美国的相关统计，10年的累计发病率约为8％-10％。随着对原发性肿瘤的早发现、早治疗、以及有效新肿瘤治疗药物方案的使用，经治疗的肿瘤病人的存活期延长，治疗相关性髓细胞瘤的病例随之增多。在美国，对治疗相关性髓细胞瘤的早期诊断和治疗早已被列为临床肿瘤病常规管理。近年来，治疗相关性髓细胞瘤在中国也开始被关注，得到越来越多的临床医生和病理学家的重视，因为治疗相关性髓细胞瘤难治，病人的死亡率高且存活期短。

治疗相关性髓细胞瘤的特点是难治性和耐药性而导致的短生存期，因而治疗相关性髓细胞瘤的早期诊断和干预，有着非常重要的临床意义。现阶段的治疗相关性髓细胞瘤诊断依据主要包括临床性指标、病理性指标、流式分型指标和细胞遗传分型指标。由于治疗相关性髓细胞瘤是一种复杂的病征，临床诊断时需要结合多种指标的检测结果综合分析，单一指标的检测结果往往只能作为中间诊断结果或参考结果用于辅助分析。

获得性细胞克隆(acquired cytogenetic clone，ACC，又称为获得性细胞遗传克隆或获得性细胞基因组克隆等)是一种细胞遗传分型指标。当异常的细胞遗传克隆仍然处于低水平时，其细胞基因组(cytogenomic)改变仍然处于沉默状态，而没有导致临床表型肿瘤的发生，即缺乏病理细胞形态改变和缺乏任何临床表型，把此正常临床状态下的新的获得性细胞克隆称为沉默型获得性细胞克隆(silent acquired cytogenetic clone，SACC)；当新的获得性细胞克隆发展到一定的水平时，相关的异常细胞基因组功能被激活并导致治疗相关性髓细胞瘤的产生，如图1所示，此克隆称为激活型获得性细胞克隆(activeacquired cytogenetic clone，AACC)。从原发性肿瘤治疗开始到AACC发生之间的时间段称为ACC发生期。SACC的发生期比AACC的发生期要长，前者为80个月而后者为47个月。从SACC发展到AACC的过程，血常规的变化首先表现在血红蛋白和血小板数降低，继之发生骨髓的细胞数变化。

在细胞遗传分型指标上，世界卫生组织(WHO)于2008年提出了骨髓增生异常综合征(MDS)的初步判定主要依据：7号染色体长臂缺失、5号染色体长臂缺失和13号染色体长臂缺失，分别简写为：del(7q)、del(5q)和del(13q)；或者各自相关的7号、5号和13号染色体的单体，分别简写为：-7、-5和-13；或者其他少见的异常细胞遗传克隆。