[发明专利]双特异性重组蛋白及其应用

权利要求书

1.一种双特异性重组蛋白，其中所述双特异性重组蛋白包含高亲和靶向肿瘤的臂和低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白；

所述高亲和靶向肿瘤的臂不结合CD47，且所述高亲和靶向肿瘤的臂对应的抗体对肿瘤细胞上靶抗原的结合亲和力是低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白所对应的单体融合蛋白同二聚体对肿瘤细胞上CD47结合亲和力的至少6倍；

所述低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白对CD47的结合亲和力不高于含SIRPα胞外截短体的单体融合蛋白的同二聚体对CD47的结合亲和力；所述SIRPα胞外截短体包含人源SIRPα野生型胞外截短体或CD47非高亲和突变的人源SIRPα胞外截短体；并且

其中所述双特异性重组蛋白具有相对设置的左、右两臂结构，其中所述的高亲和靶向肿瘤的臂位于左臂的位置，所述的低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白位于右臂的位置；

其中所述低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白包含SIRPα胞外截短体，所述SIRPα胞外截短体包含SEQ ID No:30的氨基酸序列；

其中所述高亲和靶向肿瘤的臂靶向选自CD20、EGFR、HER2和PD-L1的靶标；

其中所述双特异性重组蛋白还包含Fc区，

其中高亲和靶向肿瘤的臂靶向CD20时，所述高亲和靶向肿瘤的臂包含SEQ ID No:16和SEQ ID No:17，所述低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白包含SEQ ID No:26；

其中高亲和靶向肿瘤的臂靶向EGFR时，所述高亲和靶向肿瘤的臂包含SEQ ID No:19和SEQ ID No:8，所述低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白包含SEQ ID No:26；

其中高亲和靶向肿瘤的臂靶向Her2时，所述高亲和靶向肿瘤的臂包含SEQ ID No:20和SEQ ID No:21，或SEQ ID No:22和SEQ ID No:23，所述低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白包含SEQ ID No:26；或

其中高亲和靶向肿瘤的臂靶向PD-L1时，所述高亲和靶向肿瘤的臂包含SEQ ID No:24和SEQ ID No:13，所述低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白包含SEQ ID No:26。

2.如权利要求1所述的双特异性重组蛋白，其中高亲和靶向肿瘤的臂与低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白通过分子间作用力结合，或通过共价键结合，或通过盐键结合，或通过上述结合方式中的两种或三种的组合而结合，其中所述共价键结合为链间二硫键结合。

3.如权利要求1所述的双特异性重组蛋白，其中所述Fc区包含Fc区天然序列或Fc非天然序列。

4.如权利要求1所述的双特异性重组蛋白，其中所述Fc区为人Fc区。

5.如权利要求4所述的双特异性重组蛋白，其中高亲和靶向肿瘤的臂与低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白的结合是通过knobs-into-holes结合的。

6.如权利要求1所述的双特异性重组蛋白，其中所述高亲和靶向肿瘤的臂为半抗体。

7.如权利要求6所述的双特异性重组蛋白，其中所述半抗体为IgG1抗体的半抗体。

8.如权利要求7所述的双特异性重组蛋白，其中所述半抗体为人源化的IgG1抗体的半抗体。

9.编码权利要求1～8任一项的双特异性重组蛋白的核酸分子。

10.如权利要求9所述的核酸分子，其中编码所述高亲和靶向肿瘤的臂的核酸分子与编码所述低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白的核酸在同一条DNA链中，或编码所述高亲和靶向肿瘤的臂的核酸分子与编码所述低亲和阻断CD47与SIRPα相互作用的融合蛋白的核酸在不同的DNA链中。