[发明专利]一种利用马来甜龙竹芽尖进行高效稳定再生体系的建立方法

说明书

一种利用马来甜龙竹芽尖进行高效稳定再生体系的建立方法，属于植物组织培养技术领域。其按下列步骤进行：1）无菌芽的获得；2）愈伤组织诱导培养；3）愈伤组织分化培养；4）再生苗生根培养；5）再生植株的移栽。采用本方法最高愈伤组织诱导率为91.7%，其中乳白色致密颗粒状愈伤组织诱导率为61.7%，最高幼苗分化率为46.67%，最高生根率为55%；能够使外植体高效诱导出愈伤组织，成功建立高效稳定的再生体系，为该竹子遗传转化和细胞工程研究创造有利条件，为利用转基因技术育种奠定了良好的基础。本方法实施步骤简单易行，实施条件宽松，效果非常显著。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种利用马来甜龙竹芽尖进行高效稳定再生体系的建立方法。

背景技术

马来甜龙竹(Dendrocalamus asper）为牡竹属(Dendrocalamus）大型丛生竹类，笋味甘甜鲜脆，营养丰富，是优良的笋用竹种；竿可为造纸原料，亦宜庭园栽培，具有较高的经济价值和观赏价值。然而竹类植物因开花周期长，难预测，且不同竹种同时开花概率低，开花后竹子通常死亡，结实率低等生物学特性，使得人们很难通过杂交育种的方法选育优良的竹种。转基因技术是植物遗传育种的有效方法，但需要一个高效稳定的再生体系。然而竹子高效稳定的再生体系较难建立，目前关于竹子转基因的报道较少，仅限于丛生竹种，如麻竹（Dendrocalamus latiflorus）、版纳甜龙竹(Dendrocalamus hamiltonii)和梁山慈竹（Dendrocalamus farinosus）。

1982年，Metha等首次报道了利用体细胞胚胎发生途径成功建立印度箣竹（Bambusa arundinacea）再生体系。随后的30多年中，多个竹种的再生体系相继建立，但所选的外植体多为种胚和花药，而芽尖取材方便，更具有可行性。本专利以马来甜龙竹芽尖为外植体，诱导出愈伤组织并实现了植株再生，为遗传转化奠定坚实的基础，对此，尚未见有关资料的报道。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种利用马来甜龙竹芽尖进行高效稳定再生体系的建立方法的技术方案。

所述的一种利用马来甜龙竹芽尖进行高效稳定再生体系的建立方法，其特征在于按下列步骤进行：

1）无菌芽的获得

将马来甜龙竹种子剥去外壳置于烧杯中，浸泡24 h，0.5%次氯酸钠溶液真空抽滤20 min，无菌水冲洗干净后在体式显微镜下剥离种胚，将其接种到MS培养基中，待苗长大后移至芽增殖培养基进行培养，得到马来甜龙竹无菌苗体系；

2）愈伤组织诱导培养

取步骤1）得到的马来甜龙竹无菌苗体系，将0.5 cm长的带芽茎段接种于诱导培养基中进行诱导培养，得到愈伤组织；

3）愈伤组织分化培养

取经过增殖培养的乳白色、致密颗粒状愈伤组织接种至分化培养基中进行分化培养，得到再生苗；

4）再生苗生根培养

将步骤3）得到的再生苗移入生根培养基中进行生根诱导培养；

5）再生植株的移栽

生根诱导培养后，选取根长势粗壮且植株健壮的再生苗进行驯化移栽，将其放在驯化室下炼苗，炼苗后进行移栽培养。