[发明专利]用于检测眼部微量生物样本中VZV感染的试剂盒和方法

说明书

本发明“用于检测眼部微量生物样本中VZV感染的试剂盒和方法”，涉及眼部病毒感染的分子检测技术，特别是一种微量生物样本DNA的提取方法，所述微量生物样本指体积不超过10ul‑200ul的液体样本或体积不超过1×1mm的固体类样本。提取的DNA作为PCR检测模版，能够检测到眼部病毒感染情况，准确性达到80％以上，为后续采取合适的治疗手段提供可靠依据，减少治疗手段的盲目性。

技术领域

本发明涉及病毒感染的分子检测技术，特别是用于检测眼部微量生物样本中VZV感染的试剂盒和方法。

技术背景

由于眼部结构复杂，且受血脑屏障影响，眼部组织标本的很多检测指标与血液的检测指标相关性很低，大量临床数据研究发现，血液检查不能准确反映眼部的真实病因，特别是感染性眼病的病因；另一方面，眼部标本体积微小，标本种类多种多样，包括各种组织、各种体液(玻璃体、房水、泪液等)、各种膜类(视网膜、角膜内皮等)、多部位分泌物等，眼部液体类样本中病毒DNA含量极低，而固体样本中病毒DNA难以提出，且样本内容物及其复杂，同时受限于取样量极小(其中固体标本一般不超过1mm³；除了泪液，眼部液体标本一般能取的量约为20-100μl，最多不超过200μl)很难满足血液、尿液检验所要求的大体积和均一种类，因此对眼部标本采用常规血液检测方法进行检测，假阴性比例非常高，常常延误治疗。目前尚未见到适合于微量标本，特别是取自眼部的微量标本的病毒检测技术。

水痘－带状疱疹病毒(Varicella-Zoster Virus，VZV),在形态上与VZV相同。仅有一个血清型。基因组有71个基因，编码67个不同蛋白，包括6种糖蛋白,现统一分别命名为gE、gB、gH、gI、gC和gL。在受感染的细胞中，糖蛋白gE、gB和gH极为丰富，在病毒体的胞膜中也存在这些糖蛋白。VZV没有动物储存宿主，人是唯一自然宿主。VZV感染人有两种类型，即原发感染水痘(varicella)和复发感染带状疱疹(zoster)。皮肤是病毒的主要靶器官,曾患过水痘的病人，少量病毒潜伏于脊髓后根神经节或颅神经的感觉神经节中。潜伏的病毒可被重新激活而导致带状疱疹发生，当因某些其它疾病如外伤、长期亚健康、手术等外因导致免疫力下降，或使用免疫抑制药时，均可促使病毒复活，活化的病毒经感觉神经纤维轴突下行至所支配的皮肤区，增殖后引起带状疱疹。初期局部皮肤有异常感，搔痒、疼痛，进而出现红疹、疱疹，串连成带状，以躯干和面额部为多见，呈单侧分布，病程约3周左右，少数可达数月之久。

带状疱疹病毒感染是一种临床较为常见且很难耐受的疾病，，由三叉神经的半月神经节或某一分支受水痘一带状疱疹病毒感染所致。具有以下临床特点：(1)皮肤病变最为常见，皮肤损害的特点是在炎性红斑上群集绿豆大小的发亮水泡，以后水泡液吸收、干涸、结痂。各群皮损间有正常皮肤相隔，排列成带状，病变严格限于神经分布区而不过颜面中线。若水泡合并细菌感染，将致病变区域红肿疼痛加剧，最后化脓，愈合后可遗留疤痕，甚至受损部位的毛发不能再生。本组病例均有皮肤病变，及时就诊和治疗，病损较轻，不及时诊治或合并细菌感染则皮肤损害可以相当严重。(2)急性视网膜坏死(ARN)，80％由VZV感染所致。导致视网膜不可逆损伤，致盲性极高。(3)角膜病变较常见，占本组病例50％，多为点状角膜上皮糜烂，常伴有知觉迟钝，可引起假性树枝状角膜炎，病变位于角膜周边部，表现为树枝形斑，角膜基质弥漫水肿，荧光素不着色，对类固醇治疗反应好，有时易误诊为单纯疱疹引起的真性树枝状角膜炎。真性树枝状角膜炎常位于角膜中央，树枝细，末端膨大，上皮缺损，荧光素着色，类固醇治疗恶化。由鼻睫状神经支配的鼻上端或鼻旁部的早期带状疱疹损害预示为发生角膜炎的先兆，但亦有人认为不能因鼻睫状神经是否受累而预测。鼻睫状神经受累者均发生角膜炎，而有角膜炎者不一定就有鼻睫状神经受累。(4)虹膜睫状体炎在发病率为15％，大部分为轻度及中度的虹膜睫状体炎，KP及丁道尔征阳性。(5)本组病例继发性青光眼发病率12％。均有较严重的虹膜睫状体炎。一般认为可因房水内的色素颗粒，细胞碎屑堵塞小梁，或小梁炎症及虹膜周边前粘连而引起眼压增高。(6)眼部带状疱疹所引起的眼科神经并发症较常见的为累及第三颅神经。