[发明专利]一种可用于降解血清中葡萄糖的载酶红细胞及其制备方法

说明书

本发明属于一种可用于降解血清中葡萄糖的载酶红细胞及其制备方法。该方法包括以下步骤：（1）以红细胞为载体，采用低渗‑重封闭法包载葡萄糖氧化酶；（2）将步骤（1）得到的载酶红细胞用Triton X‑100处理，改善红细胞膜渗透性；（3）载酶红细胞的固化。该载酶红细胞能有效降解血清中的葡萄糖。

技术领域

本发明属于降血糖药物领域，具体涉及一种可用于降解血清中葡萄糖的载酶红细胞及其制备方法。

技术背景

据国际糖尿病联盟2011年统计，全球糖尿病患病人数为3.66亿，预计2030年将达到5.52亿。在我国，成人糖尿病的患病率为9.7%，患者总数已超过9000万人，成为世界第一糖尿病大国。其中，1型糖尿病，原名胰岛素依赖型糖尿病，多发生在儿童和青少年，体内胰岛素绝对不足，容易发生酮症酸中毒，必须用胰岛素治疗才能获得满意疗效，否则将危及生命。但是胰岛素价格昂贵，且长期注射胰岛素会给病人带来极大的痛苦，因此需要寻找新的方法控制血糖。

葡萄糖氧化酶（GOD）在有氧条件下，能专一性地催化β-D-葡萄糖，生成葡萄糖酸和过氧化氢。GOD不仅用于食品工业、纺织漂染等行业，而且在生物燃料、葡萄糖生物传感器等新兴领域也有广泛的应用。红细胞是体内重要的氧气载体，能为葡萄糖的氧化提供充足的反应底物；红细胞细胞器少，已有研究将其作为药物、酶的载体用作疾病治疗。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种可用于降解血清中葡萄糖的载酶红细胞及其制备方法。该方法以红细胞为载体，利用低渗-重封闭法包载葡萄糖氧化酶，再用Trition X-100红细胞进行预处理，改善细胞膜的通透性，并用戊二醛对红细胞进行固化。所得载酶红细胞能有效降解血清中的葡萄糖。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种可用于降解血清中葡萄糖的载酶红细胞的制备方法，包括以下步骤：

（1）以红细胞为载体，采用低渗-重封闭法包载葡萄糖氧化酶；

（2）将步骤（1）得到的载酶红细胞用Triton X-100处理，改善红细胞膜渗透性；

（3）载酶红细胞的固化。

步骤（1）具体为：

a. 葡萄糖氧化酶溶液的制备：将葡萄糖氧化酶粉末溶解在缓冲液中，配成葡萄糖氧化酶溶液；

b. 葡萄糖氧化酶的包载：将红细胞与葡萄糖氧化酶溶液混合在低渗缓冲液中，反应3分钟；

c. 载酶红细胞的重封闭：用高浓度的PBS缓冲液迅速将混合溶液浓度调节为等渗；

d. 用1×PBS洗涤5次以除去未包封的葡萄糖氧化酶，获得载酶红细胞。

步骤a 所配制的葡萄糖氧化酶溶液其浓度为40 mg/mL。

步骤b所述的低渗缓冲液为0.2×PBS，pH为7.4。

步骤b中红细胞、葡萄糖氧化酶溶液和低渗缓冲液的体积比为1:2:7。

步骤c中所述的高浓度的PBS缓冲液为20×PBS缓冲液。

步骤（2）具体为：将载酶红细胞与含有0.19 mM Trition X-100 的1×PBS混合，缓慢震荡后，离心，用1×PBS缓冲液清洗红细胞5-8次，离心得渗透性改良的红细胞，于4℃保存。

步骤（3）具体为：载酶红细胞用0.1wt%戊二醛溶液处理3分钟后，PBS缓冲溶液清洗3遍。

一种如上所述的制备方法制得的载酶红细胞。

一种如上所述的载酶红细胞在制备用于降解血清中葡萄糖的药物中的应用。