[发明专利]寡糖的大规模酶合成的方法

权利要求书

1.一种酶反应器，其特征在于，包含：

(a)用于合成Globo三糖-OR^1A(Gb3-OR^1A)的反应室，其中该室包含α-1,4-半乳糖转移酶及UDP-Gal再生酶组；

(b)用于合成Globo五糖-OR^1A(Gb5-OR^1A)的反应室，其中该室包含β-1,3-半乳糖转移酶及UDP-Gal再生酶组；或

(c)其组合，

其中通过Gb3-合成反应混合物进行Gb3-OR^1A合成，该Gb3-反应混合物包含半乳糖、磷酸烯醇丙酮酸(PEP)、ATP、UTP、Lac-OR^1A、α-1,4-半乳糖转移酶及UDP-Gal再生酶组，

其中通过Gb5-合成反应混合物进行Gb5-OR^1A合成，该Gb5-反应混合物包含半乳糖、PEP、ATP、UTP、Globo四糖-OR^1A(Gb4-OR^1A)、β-1,3-半乳糖转移酶及UDP-Gal再生酶组，

其中UDP-Gal再生酶组包含半乳糖激酶、UDP-糖焦磷酸化酶、丙酮酸激酶，

其中R^1A为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的环碳基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的杂芳基或氧保护基团、生物素或神经酰胺。

2.如权利要求1所述的酶反应器，其特征在于，UDP-Gal再生酶组还包含：焦磷酸化酶。

3.如权利要求1所述的酶反应器，其特征在于，在至少一个该反应室中的至少一个酶是固定于一支持体上。

4.如权利要求1所述的酶反应器，其特征在于，该酶反应器还包含下列反应室(i)、(ii)及(iii)中的至少一个：

(i)用于合成Globo四糖-OR^1A(Gb4-OR^1A)的反应室，其中该室包含β-1,3-N-乙酰半乳糖胺转移酶及UDP-GalAc再生酶组，其中该再生酶组包含N-乙酰己糖胺1-激酶、N-乙酰葡萄糖胺1-磷酸尿苷酰转移酶、丙酮酸激酶；

(ii)用于合成岩藻糖-Gb5-OR^1A的反应室，其中该室包含α-1,2-岩藻糖转移酶及GDP-Fuc再生酶组，其中该再生酶组包含L-岩藻糖激酶/GDP-岩藻糖焦磷酸化酶、丙酮酸激酶；及

(iii)合成唾液酸-Gb5-OR^1A的反应室，其中该室包含α-2,3-唾液酸转移酶及CMP-Neu5Ac再生酶组，其中该再生酶组包含胞苷单磷酸激酶、CMP-唾液酸合成酶、丙酮酸激酶。

5.如权利要求4中所述的酶反应器，其特征在于，一或多个UDP-Gal再生酶组、UDP-GalNAc再生酶组、GDP-Fuc再生酶组及CMP-Neu5Ac再生酶组是各自固定于支持体上。

6.如权利要求5所述的酶反应器，其特征在于，各反应室中的所有酶是固定于支持体上。

7.一种酶反应器，其特征在于，包含反应室，该反应室包含半乳糖、PEP、ATP、UTP、底物分子、半乳糖转移酶及UDP-Gal再生酶组，其中该再生酶组包含半乳糖激酶、UDP-糖焦磷酸化酶、丙酮酸激酶；该底物分子为多糖、寡糖、糖蛋白、糖脂或配糖基。

8.如权利要求7所述的酶反应器，其特征在于，UDP-Gal再生酶组还包含：焦磷酸化酶。

9.如权利要求7所述的酶反应器，其特征在于，该半乳糖转移酶为α-1,4-半乳糖转移酶、β-1,4-半乳糖转移酶、α-1,3-半乳糖转移酶或β-1,3-半乳糖转移酶。

10.如权利要求7所述的酶反应器，其特征在于，至少一个酶是固定于一支持体上。