[发明专利]一种当归蛋白在制备防护肝损伤药物中的应用

说明书

本发明涉及天然中药蛋白领域，更具体地涉及一种当归蛋白在制备防护急性肝损伤药物中的应用，所述当归蛋白N端序列为GIQKTEVEAPSTVSA。所述当归蛋白对正常肝细胞L‑02具有显著的促增殖作用，在0.5 mg/mL的剂量下，可使L‑02细胞的增殖率达到163.14%。所述当归蛋白用于制备预防肝损伤药物，可显著提高损伤鼠肝脏CAT、GST和T‑AOC活力极显著地减轻肝脏MDA水平，显著改善损伤鼠肝脏的肝细胞坏死状况，进而显著降低损伤鼠血液ALT、AST活力及肝脏指数，使之基本恢复至正常组水平，从而显著减轻CCl₄对小鼠肝脏的损伤。

技术领域

本发明涉及天然中药蛋白领域，更具体地涉及一种当归蛋白在制备防护肝损伤药物中的应用。

背景技术

肝脏是人体内最重要的器官之一，负责内源性和外源性物质的代谢、分泌、储存和解毒。目前，在全球范围内，肝病仍然是公共卫生面临的主要威胁之一。化学性肝损伤是指化学性肝毒性物质包括酒精、环境中的化学有毒物质及某些药物（例如化疗药等）所造成的肝损伤，若没有及时治疗将会对肝脏造成不可逆转的伤害，严重的将导致肝纤维化、肝硬化甚至肝癌。尽管现代医学取得了巨大的进展，从一些植物中获得了多种具有保肝作用的化合物，但是还没有完全有效的药物可以提供对器官的完全保护，或者帮助肝细胞再生。因此，人们一直在寻找高效安全的保肝物质。

当归[Angelica sinensis（Oliv.）Diels]是伞形科当归属的一种多年生草本植物。当归是用于治疗贫血、便秘、心血管疾病和肝纤维化的中药（TCM）中最受欢迎的植物之一，已被使用数千年。当归总蛋白具有清除DPPH自由基能力，且既能极显著促进正常肝细胞L-02的增殖（P0.01），又能极显著抑制白血病细胞K562的增殖（P0.01）。

本发明从中药当归中得到当归PR-10家族蛋白——ASPR。病程相关蛋白-10家族（PR-10）蛋白广泛分布于各种属以及植物各器官中，属于植物抗逆蛋白，与植物抵抗生物胁迫（病原体）与非生物胁迫（干旱，热量，寒冷和盐分）的能力有关。

本发明提供了当归蛋白ASPR的制备方法及其在预防肝损伤的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种当归蛋白在制备防护肝损伤药物中的应用，以开发新型肝损伤防护剂。

本发明采取的技术方案如下：

所述当归蛋白的制备方法为：

以10倍体积0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）浸泡当归饮片，4 ℃抽提过夜，次日用4层纱布过滤残渣，滤液于12000 rpm、4℃离心10 min，收集上清。将所得的上清进行80%硫酸铵沉淀，收集沉淀，溶于2倍体积的0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）中，经Sephadex G-50层析柱分离，收集第二个洗脱峰，即为目的蛋白ASPR，分子量为18.33 kDa，经过序列测定，N端序列为GIQKTEVEAPSTVSA。

所述当归蛋白可用于制备预防肝损伤的药物。

所述当归蛋白的使用浓度为0.5-2 mg/mL；将无菌过滤过的当归ASPR蛋白以无菌的PBS或生理盐水稀释至使用浓度。使用方法为连续肌肉注射或静脉注射当归ASPR蛋白3d，每次0.5mL。

本发明的优点在于：

（1）本发明首次将当归ASPR蛋白用于预防肝损伤模型。

（2）本发明证实当归ASPR蛋白对正常肝细胞L-02具有显著的促增殖作用，在0.5mg/mL的剂量下，可使L-02细胞的增殖率达到163.14%。