[发明专利]用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡与制备方法

说明书

本发明公开了一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡与制备方法；旨在提供一种灵敏度高，检测结果可靠的用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡；其技要点包括底板，在底板上依次衔接有样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫，所述结合垫上设有荧光微球标记的CCV单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡IgY，所述的硝酸纤维膜设有一条包被鸡IgY的质控C线，以及一条包被CCV单克隆抗体的检测T线；属于动物疫病检测领域。

技术领域

本发明公开了一种免疫荧光层析检测卡，具体地说，是一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，本发明还公开了该免疫荧光层析检测卡的制备方法。

背景技术

犬冠状病毒病的病原体是犬冠状病毒(Canine Corona Virus,CCV)。以轻重不一的胃肠炎为临床特征，临床上呈致死性的水样腹泻。突然发病、精神消沉、食欲废绝、呕吐、排出恶臭稀软而带粘液的粪便。呕吐常可持续数天，直至出现腹泻前才有所缓解。以后，粪便由精状、半糊状至水样，呈橙色或绿色，内含粘液和数量不等的血液。迅速脱水，体重减轻。感染源主要是病犬和带毒犬，病犬排毒时间为14天，保持接触必传染的能力为期更长病犬经呼吸道、消化道随口涎、鼻液和粪便向外排毒，污染饲料、饮水、笼具和周围环境，直接或间接地传给有易感动物。CCV在粪便中可存活6—9天，在水中也可保持数日的传染性，因此一旦发病，则很难制止传播流行。犬冠状病毒广泛分布于全世界,是对我国养犬业、毛皮动物养殖业危害最大的疫病之一。

中国专利ZL201620488080.4公开了一种快速检测犬冠状病毒抗体的胶体金试纸卡，在塑料底板一端粘贴样品垫，样品垫的一端紧密压接含有标记抗犬冠状病毒抗原的金标垫，金标垫的一端紧密压接含有标记鼠IgG抗体的金标鼠IgG抗体垫，金标鼠IgG抗体垫一端紧密压接硝酸纤维素NC膜，NC膜上包被有相互分离的检测线T和质控线C，NC膜的另一端连接吸水垫形成试纸，试纸装入塑料卡壳内形成试纸卡。该专利采用传统的胶体金层析技术，免疫标记物依靠静电吸附，存在灵敏度较低、难以定量、重复性和稳定性较差等缺陷，无法完全满足临床的检测需求。另外，犬感染犬冠状病毒后，以轻重不一的胃肠炎为临床特征，冠状病毒一般存在于病犬的粪便中，而犬冠状病毒抗体一般存在犬的血液中，该专利采用双抗原夹心法检测粪便中的犬冠状病毒抗体，可能存在检出率较低，准确性较差等情况。

中国专利ZL201410753855.1公开了一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试纸条，包括标记物垫和捕获膜，所述标记物垫含有荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体，所述捕获膜含有捕获探针。该方法存在下述问题：采用试剂瓶分装荧光标记的犬冠状病毒抗体，而不是直接喷到标记物垫上，这样整个检测卡非干式，需要冷藏，检测时，需要先把含犬冠状病毒的样品溶液加入到试剂瓶中，操作欠方便，不合适现场检测。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种灵敏度高，检测结果重现性好的用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡。

本发明的第二个目的是提供上述检测试剂卡的制备方法。

为此，本申请提供的第一个技术方案是这样的:

一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，包括底板，在底板上依次衔接有样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫,其特征在于，所述结合垫上设有荧光微球标记的CCV单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡IgY，所述的硝酸纤维膜设有一条包被IgY的质控C线，以及一条包被CCV单克隆抗体的检测T线。

进一步的，上述的一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，还包括样品稀释瓶。

进一步的，上述的一种用于检测犬冠状病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，其特征在于，所述样品稀释瓶内装有样品稀释液，所述样品稀释液为含0.8％S21、0.03％Proclin300的0.01M的pH7.4磷酸盐缓冲液。

本申请提供的第二个技术方案是这样的：