[发明专利]一条可与猪瘟病毒E2蛋白结合的亲和肽及其应用

说明书

本发明主要涉及一条可与猪瘟病毒E2蛋白结合的亲和肽及其应用，该亲和肽序列为HRKWKSKWK(P₇)。本发明以牛病毒性腹泻病毒E2蛋白晶体结构为模板，同源建模获得猪瘟病毒E2蛋白的三维结构，借助虚拟分子对接技术，最终获得一条具有高评分值的多肽序列，即为P₇；人工合成P₇序列采用ELISA及SPR试验鉴定其与E2蛋白相互作用的亲和性及特异性，结果显示P₇与E2具有较高亲和性及特异性结合；然后通过qRT‑PCR及IPMA试验验证其抑制病毒感染的活性，结果表明P₇序列具有较好抑制猪瘟病毒感染PK‑15细胞的活性。本发明可为进一步研究病毒受体及抗病毒药物设计提供可靠的理论依据及新的思路。

技术领域

本发明涉及一条可与猪瘟病毒E2蛋白结合的亲和肽及其应用，具体涉及靶向猪瘟病毒E2蛋白亲和肽的设计及其抗猪瘟病毒感染活性的研究，属于多肽设计及抗病毒感染研究领域。

背景技术

随着基因组学及蛋白质组学的迅猛发展，越来越多生物大分子的三维结构被解析，截止2017年1月，已经有超过12万个晶体结构被导入蛋白质数据库中。基于氨基酸序列分析的同源建模方法的进一步深入研究，对于某些在现有技术水平下无法解析其结构的生物大分子而言，也可通过建模的方式来分析其三维结构，这就大大拓展了基于结构分析的蛋白质研究范围。计算机辅助多肽设计技术的飞速发展，使得蛋白质与其配基多肽之间相互作用的研究更加精细与深入。计算机虚拟辅助设计可以实现氨基酸残基更加自由的突变，尤其是分子动力学的发展及新的更加精准的分子对接方法的出现，对于多肽筛选工作而言，不仅操作方便快捷，降低多肽筛选的强度及缩短研发周期，还大大地提升了筛选成功率。

猪瘟(Classical swine fever，CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fevervirus，CSFV)引起的一种高致病力、高死亡率的接触性传染病。该病在我国一直流行，且以地区散发性为主；尽管各大养殖场对CSF给予极大的关注，但由于不科学的免疫程序、参差不齐的疫苗质量及猪群不规范的饲养条件等，致使当前CSF仍然严重威胁着我国的养猪业。E0、E1及E2是CSFV的三个囊膜糖蛋白，其中E2是病毒最主要的抗原蛋白，同时E2也在CSFV与宿主细胞的相互识别及吸附过程中起重要介导作用；因此，E2蛋白的深入研究，对于探讨CSF的感染机制及新型疫苗的设计都具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一条可与猪瘟病毒E2蛋白结合的亲和肽及其应用，该亲和肽与E2蛋白具有良好的亲和性及特异性结合，且对CSFV感染PK-15细胞具有较好的抑制活性。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一条可与猪瘟病毒E2蛋白结合的亲和肽，所述亲和肽的序列为HRKWKSKWK。

还包括所述的亲和肽序列为核心，任何对亲和肽序列进行的相应调整或修饰，修饰材料包括但不限制在纳米材料、荧光材料、酶类、生物素及特定的蛋白质上。

一种亲和肽在制备猪瘟病毒或者牛病毒性腹泻病毒检测试剂盒中的应用。

检测试剂盒为用于酶联免疫吸附试验检测。

一种亲和肽在制备抑制猪瘟病毒或者牛病毒性腹泻病毒感染药物方面的应用。

与现有技术相比，本发明有益效果：