[发明专利]一种尿液中单羟基多环芳烃的分析检测方法

说明书

本发明公开了一种尿液中单羟基多环芳烃的分析检测方法，是建立固相萃取‑液相色谱‑串联质谱同时测定1‑羟基萘、2‑羟基萘、2‑羟基芴、1‑羟基菲、2‑羟基菲、3‑羟基菲、4‑羟基菲、9‑羟基菲、1‑羟基芘和6‑羟基的方法，将2mL尿液经酶水解，通过CNWBOND HC‑C18固相萃取小柱富集净化后，用10mL甲醇洗脱，在柔和氮气下氮吹至近干，以甲醇定容至1mL，用色谱柱分离目标化合物，在电喷雾离子源负离子模式下检测。本发明的优点在于：适用于生物样品的尿液中多环芳烃暴露的检测研究，能够同时测定人体尿液中10种单羟基多环芳烃，具有前处理简单、检测限低、稳定性好、准确性好的优点。

技术领域

本发明涉及多环芳烃检测技术领域，特别涉及一种尿液中单羟基多环芳烃的分析检测方法。

背景技术

多环芳烃是(PAHs)是指分子中含有两个或者两个以上苯环的芳香烃类，常见有萘、芴、菲、芘等。环境中的多环芳烃主要来源于煤炭、石油、木材等有机物的热解和不完全燃烧。已有的研究结果表明，PAHs在空气、水、土壤等环境介质中均有检出，在生物样品中，如血液、尿液以及头发中也均有发现。

尿液中OH-PAHs的测定流程包括样品前处理和仪器检测两个部分。其中样品前处理过程对检测方法的检测限、稳定性以及准确性等均有影响，目前报道的OH-PAHs的萃取技术主要有固相萃取、固相微萃取、液液萃取等方法，但目前以固相萃取技术最为成熟，效果稳定，是最常用的萃取技术。

目前OH-PAHs的仪器检测方法主要包括高效液相色谱(HPLC)法、液相(气相)色谱-质谱联用(LC/GC-MS)法、同步荧光光谱法、毛细管电泳法、酶联免疫法(ELISA)以及电化学法等。HPLC虽然具有灵敏、准确、检出限低的特点，但是处理过程过于复杂，不易应用于大量样品的检测；同步荧光法的样品不需要预处理，虽然操作简单，但是干扰性太大；毛细管电泳法具有分离效果好、分析速度快以及重现性较好等诸多优点，但是其应用范围较窄；ELISA法特异性较强，灵敏度也较高，但是干扰性太大，容易出现交叉反应；GC-MS法对同分异构体的测定具有优势，但是样品需要衍生化处理，前处理过程过于复杂。

发明内容

本发明针对现有技术的缺陷，提供了一种尿液中单羟基多环芳烃的分析检测方法，能有效的解决上述现有技术存在的问题。为了实现以上发明目的，本发明采取的技术方案如下：

一种尿液中单羟基多环芳烃的分析检测方法，包括以下步骤：

步骤1，配制10种单羟基多环芳烃标准品的单标溶液，再取适量10种单标溶液配成含有各种单羟基多环芳烃的混合标准溶液和含有2种氘代羟基多环芳烃的混合内标溶液。通过液相色谱-串联质谱方法建立10种单羟基多环芳烃的标准曲线。

步骤2，将尿液样品在室温下解冻，待尿液解冻后精确移取2mL尿样加入10mL具塞离心管中，并在离心管中再加入3mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液，之后分别精确移取10μLβ-葡萄糖苷酸/芳基硫酸脂酶和混合内标液加入离心管中，用涡旋振荡器混合均匀，将离心管塞盖好后放入恒温水浴振荡器37℃水浴12h，待水浴12h后取出准备过SPE小柱。

步骤3，将SPE小柱装到十二孔固相萃取装置上，取5mL甲醇加入SPE小柱中使其充分活化，再加入5mL超纯水使其平衡，并在超纯水未完全通过前加入样品，保持样品以1mL/min的速率通过。

步骤4，待样品完全通过SPE小柱后，加入4mL超纯水淋洗萃取柱，待淋洗液通过萃取柱后，在真空条件下保持1min，充分去除SPE小柱中的水分，再用10mL的甲醇洗脱小柱，收集洗脱液到试管中氮吹至近干，以甲醇定容至1mL，用涡旋振荡器混合均匀后，过0.2μm孔径有机滤膜的针头滤器过滤至棕色样品瓶中，待进样。

步骤5，得出结果后，按照上述步骤1中的内标溶液浓度为10μg/mL的标准系列溶液所描绘制的标准曲线上查出样品中10种单羟基多环芳烃含量。