[发明专利]一种用于检测组蛋白乙酰转移酶的光电化学传感器及其检测方法

权利要求书

1.一种用于检测组蛋白乙酰转移酶的光电化学传感器，其特征在于，包括：电极，依次固定在电极表面的石墨烯-纳米金、MoS₂纳米片、氨基功能化的SiO₂纳米材料、SMCC、辅酶A、ZrO₂、生物素修饰的双链DNA和亲和素修饰的β-半乳糖苷酶；

所述生物素修饰的双链DNA，其中一条DNA链修饰有磷酸根，其序列如SEQ ID NO.1所示；另一条DNA链修饰有生物素，其序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述的光电化学传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）对电极进行预处理；

（2）分别将石墨烯-纳米金、MoS₂纳米片和SiO₂-NH₂加入到去离子水中，超声分散，得到分散液，将石墨烯-纳米金分散液、MoS₂纳米片分散液和SiO₂-NH₂分散液依次滴加到预处理后的电极表面，干燥；

（3）将SMCC溶液滴加到步骤（2）处理后的电极表面，室温和潮湿条件下反应0.5-3h，清洗，再将组蛋白乙酰转移酶催化底物肽乙酰化后的催化反应液滴加到电极表面，室温和潮湿条件下反应0.5-3h；

（4）将ZrO₂加入到去离子水中，超声分散，得到ZrO₂分散液，将ZrO₂分散液滴加到步骤（3）处理后的电极表面，室温和潮湿条件下反应0.5-3h；

（5）将生物素修饰的双链DNA溶液滴加到步骤（4）处理后的电极表面，25-40℃、潮湿条件下反应0.5-3h；

（6）将亲和素修饰的β-半乳糖苷酶溶液滴加到步骤（5）处理后的电极表面，15-40℃、潮湿条件下反应2-7h，即制备得到用于检测组蛋白乙酰转移酶的光电化学传感器。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，电极预处理的方法为：将电极先用乙醇和氢氧化钠的混合液超声清洗，再用丙酮和二次水清洗，晾干。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述催化反应液由如下方法制备而成：

将20-50 μL不同浓度的组蛋白乙酰转移酶、20-50 μL的底物肽、10-40 μL乙酰辅酶A、20-50 μL 10 mM Tris-HCl混合均匀，该Tris-HCl的pH为7.5；然后将混合液在20-50°C下温育1-5小时。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述底物肽的氨基酸序列如SEQ IDNO.3所示。

6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，所述底物肽的浓度为10-40 μM，乙酰辅酶A的浓度为100-300 μM。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述潮湿条件是指湿度为75-99%。

8.权利要求1所述的光电化学传感器在检测组蛋白乙酰转移酶的应用。

9.一种利用权利要求1所述的光电化学传感器检测组蛋白乙酰转移酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

以上述光电化学传感器作为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂柱电极为对电极，含有4-氨基苯-β-D-半乳糖苷的Tris-HCl缓冲液为检测液，该含有4-氨基苯-β-D-半乳糖苷的Tris-HCl缓冲液的pH为7.4，建立光电流与组蛋白乙酰转移酶浓度之间的关系，对样品中组蛋白乙酰转移酶含量进行检测。