[发明专利]曼氏无针乌贼Spef1及其用途

说明书

本发明公开了曼氏无针乌贼Spef1及其用途，曼氏无针乌贼精子鞭毛蛋白Spef1基因的cDNA全长共1135bp，其中5′UTR178bp，3′UTR165bp，开放阅读框区共792bp，编码263个氨基酸；编码蛋白相对分子质量为30.5677kDa，等电点pI为7.03。有益效果为：运用分子生物学手段分析了曼氏无针乌贼精子鞭毛蛋白Spef1的基因序列、基因表达组织特异性，并对其mRNA在乌贼组织中的特异表达定位进行了细胞定位，在精巢精小叶、初级精母细胞以及次级精母细胞中均由显著的表达，曼氏无针乌贼精子鞭毛蛋白Spef1及其拮抗剂可以用于在头足类养殖过程中进行生殖调控。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及曼氏无针乌贼Spef1及其用途。

技术背景

曼氏无针乌贼（Sepiella japonica）隶属于软体动物门（Mollusca）、头足纲（Cephalopoda）、十腕目（Decapoda）、乌贼科（Sepiidae）、无针乌贼属（Sepiella），又名日本无针乌贼、墨鱼。作为曾经的东海“四大海产”之一，是一种重要的经济头足类物种。上世纪80年代以来人为的过度捕捞以及海洋生态环境的逐步恶化，导致其自然种群资源已经遭到严重破坏。众多学者对曼氏无针乌贼的资源分布、生物学特性、繁殖生物学以及增养殖方面进行了大量的研究，这些基础性的研究对于人工育苗奠定了坚实的基础，积累了丰富的经验。近年来在沿海各地开展的人工规模化养殖以及增殖放流已初见成效，并创造了一定的生态效益，目前已经具备规模化人工繁育技术，并已形成一定规模的曼氏无针乌贼养殖产业。

众所周知，生物体的繁殖是使种群不断延续的重要过程，精卵细胞的结合又包含了很多复杂的生物化学反应，众多的生物化学因子在这个过程中发挥独特的作用并直接或者间接的影响着受精过程的顺利进行。精子鞭毛蛋白1（Spef1）是存在于雄性个体生殖系统中的特异性蛋白，截至目前的研究认为Spef1可能参与了精子的发生，尤其是在精子鞭毛结构的形成以及组装过程中发挥了重要作用。

发明内容

本发明的目的之一在于提供曼氏无针乌贼精子鞭毛蛋白Spef1，分子生物学手段分析了曼氏无针乌贼精子鞭毛蛋白Spef1的基因序列，通过基因表达组织特异性分析、基因组织表达定位分析研究了Spef1的表达与定位，分析过程中组织切片与原位杂交是对组织与细胞的固定效果较好，提高了表达与定位的精确度。

本发明的目的之二在于提供曼氏无针乌贼精子鞭毛蛋白Spef1的用途，Spef1在精巢精小叶、初级精母细胞以及次级精母细胞中均由显著的表达，因此Spef1可用于在头足类养殖过程中利用精子鞭毛蛋白及其拮抗剂进行生殖调控。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：

曼氏无针乌贼精子鞭毛蛋白Spef1基因的cDNA全长共1135bp，其中5′UTR178bp，3′UTR165bp，开放阅读框（ORF）区共792bp，编码263个氨基酸；编码蛋白相对分子质量为30.5677kDa，等电点（pI）为7.03。Spef1蛋白无跨膜结构，不含信号肽序列，因此曼氏无针乌贼精子鞭毛蛋白Spef1不是分泌蛋白。

曼氏无针乌贼精子鞭毛蛋白Spef1基因的cDNA全序列为：