[发明专利]一种T细胞无血清培养基及其使用方法

说明书

本发明属于培养基领域，具体涉及一种T细胞无血清培养基及其使用方法，包括用于细胞生长培养的基础培养基，以及其他添加成分；所述其他添加成分包括乙醇胺、硫酸酮、硝酸铁、硫酸锌、亚硒酸钠、丙酮酸钠、胰岛素、转铁蛋白、谷氨酰胺、血清白蛋白、硫代甘油、L‑维生素C。本发明突破了现有技术的缺陷，在开发的整个培养基体系中没有引入非人源性蛋白，对来源安全可靠的血液样本中的T细胞进行选择性地高效扩增，具有更高的临床应用和科研价值。

技术领域

本发明属于培养基领域，具体涉及一种T细胞无血清培养基及其使用方法。

背景技术

T细胞是淋巴细胞的主要组分之一，它具有多种生物学功能，如直接杀伤靶细胞，辅助其它淋巴细胞发挥功能，对特异性抗原或促有丝分裂原的应答反应以及产生细胞因子，是身体抵御疾病感染、防止肿瘤形成的主要免疫细胞之一。在体外富集、活化、扩增这类免疫细胞，可用于回输治疗多种疾病，包括恶性肿瘤、感染、自身免疫病等，在这个过程中，需要使用一种可以在体外支持T细胞存活和扩增的培养基。

目前T细胞培养多用RPMI-1640或者DMEM培养基，但由于T细胞在体外存活和扩增需要的营养物质包括：氨基酸、维生素、糖、脂质、无机盐、生长因子等。单纯的RPMI-1640或者DMEM培养基无法提高T细胞生长必须的营养成分，因此目前培养T细胞多用含有10～20wt％胎牛血清的RPMI-1640或者DMEM培养基。但是使用胎牛血清培养T细胞存在多种问题，不仅增加了培养基的成本，而且不同品牌、不同批次的胎牛血清之间差异较大，另外由于胎牛血清中成分复杂，这些成分会严重影响后续试验的准确性和可靠性，培养基可重复性差，培养效率仅为15～20％。而且由于临床所使用的细胞制品严禁残留动物血清蛋白，而常规培养基中存在胎牛血清，工艺上需要增加细胞制成品中牛血清蛋白的残余检测，增加了生产难度和成本，促使人们开始进行无血清培养基的开发。

戴育成(申请公布号：CN102191215A)发明了一种用于培养CIK细胞的人源性无血清培养基，培养基中含有多种人血来源的成分，包括人白蛋白、人转铁蛋白、人胆固醇、人过氧化氢酶等，证实培养基的培养效果与2％人血清的培养基相当。Invitrogen公司生产的用于体外淋巴细胞培养的培养基AIM-V也含有人体来源的人血白蛋白和人转铁蛋白。Invitrogen公司的另一款用于体外培养T淋巴细胞的培养基optmizer也只是不含有动物来源的成分，但还是含有人体来源的人血白蛋白和人转铁蛋白。这些培养基中都或多或少地添加了动物来源或人血来源的成分，虽然有严格的检测和病毒灭活的处理，但是还是存在一定的安全性隐患。

因此、目前T细胞培养基存在培养效率不高、细胞活性低下、后续试验干扰、动物血清蛋白残留等较大的问题。作为涉及临床应用上的T淋巴细胞培养基，应该有以下几个特点：安全、稳定、廉价等。本发明着力于解决上述问题，提供了一种更加安全，质量更稳定且成本低廉的T淋巴细胞培养基，而且其培养人T淋巴细胞的效果与含人血清的培养基相当，部分指标优于含人血清培养基。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种T细胞无血清培养基及其使用方法，该培养基的不含有任何动物来源和人体来源的成分，避免了任何因为使用含动物来源的成分或人体来源的成分可能带入的传染性疾病，因此有更高的安全性，同时培养效率也大大提高。

本发明提供了一种T细胞无血清培养基，包括用于细胞生长培养的基础培养基，以及其他添加成分；

所述其他添加成分包括乙醇胺、硫酸酮、硝酸铁、硫酸锌、亚硒酸钠、丙酮酸钠、胰岛素、转铁蛋白、谷氨酰胺、血清白蛋白、硫代甘油和L-维生素C。