[发明专利]一组评估早期流产风险的DNA甲基化标志物、引物及其应用

说明书

本发明属于基因工程领域，具体提供一组用于评估早期流产风险的血液DNA甲基化标记物、引物及其应用。本发明的DNA甲基化标志物包括位于PRDM1基因转录起始区附近的8个DNA甲基化位点；cg25608130,cg19577529，cg10573915，cg11072009，cg02667677，cg23778363，cg24793124，cg07331652。本发明提供的该类差异DNA甲基化生物标志物的成功开发是对以蛋白为主的传统生物标志物的颠覆，将为诊断及防治早期流产开创全新局面，为其他疾病生物标志物的研制提供借鉴。本发明取材简单，操作方便，是具有前景的生物标志。

发明领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一组用于评估早期流产风险及辅助诊断早期流产的DNA甲基化标记物、引物及其应用。

背景技术

自然流产(Spontaneous Abortion/Pregnancy Loss)是指临床上孕20周之前终止妊娠或胎儿体重小于500g的妊娠丢失。它是临床上较为常见的病理妊娠，发生率约为10％-15％。作为一种病理性妊娠，自然流产对育龄妇女的生理、心理及家庭带来了极大伤害。目前关于早期流产的具体发病机制仍不明确，治疗手段也效果甚微。因此，研究早期流产的具体发病机制，从而针对性的诊断和治疗显得尤为重要。

DNA甲基化是基因组研究最深入的一种机制，是一种酶介导的化学修饰过程。DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶的作用下，基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶5'碳原子共价键结合一个甲基基团。DNA甲基化对维持染色体的结构、X染色体的失活、基因印记以及许多人类基因病(如癌症、心血管疾病、糖尿病)的发生发展都起重要作用。在正常的胚胎发育进程中,胚层分化特异性表达基因被激活，此过程同时涉及DNA甲基化的调控。胚胎成功着床后，滋养层细胞迅速增生并分化为内层的细胞滋养层和外层的合体滋养层。两层细胞在胚泡表面形成大量绒毛，突入蜕膜中。这些绒毛中央为细胞滋养层，外表为合体滋养层，是最早的干绒毛。绒毛的发育使其与子宫蜕膜的接触面增大，利于胚胎与母体间的物质交换。在绒毛膜的发育过程中，若绒毛内的血管发育不良或与胚体循环未连通，胚体可因营养缺乏而发育迟缓或死亡。有研究报导，DNA甲基化转移酶的多态会改DNA甲基化水平增加流产的风险，且动物实验也证明滋养层细胞DNA甲基化异常会导致绒毛组织的功能异常引起流产。

基因组上存在大量的DNA甲基化位点，修饰稳定，易于定量检测。因此，DNA甲基化作为一类新的基因组修饰，其差异可以作为早期流产诊断的分子标志物，可快速评估早期流产风险。目前还没有将血液DNA甲基化应用于辅助诊断早期流产的报道，若能筛选出流产相关的DNA甲基化作为生物标志物，能够快速评估早期流产风险并为防治提供依据。

发明内容

本发明的第一目的是提供一组评估人类早期流产DNA甲基化标志物，用于辅助诊断早期流产的标记物，以实现快速评估早期流产风险并为防治提供依据。

本发明所采用的技术方案为：

一组评估早期流产风险的DNA甲基化标志物，所述的DNA甲基化标志物包括与PRDM1基因启动子区DMR所对应的8个DNA甲基化位点；

所述的8个DNA甲基化位点为cg25608130,cg19577529，cg10573915，cg11072009，cg02667677，cg23778363，cg24793124，cg07331652。

进一步的，所述的8个DNA甲基化位点在流产病例中甲基化水平显著降低10％以上。