[发明专利]头颈部鳞癌标志物引物组合、检测试剂盒及其定量检测方法

说明书

本发明公开了用于检测头颈部鳞癌标志物的引物组合，包括用于miR‑10b定量检测的正向引物、用于miR‑31定量检测的正向引物、用于miR‑24定量检测的正向引物中的至少一种。本发明还公开了头颈部鳞癌标志物检测试剂盒，包括用于定量检测miR‑10b、miR‑31、miR‑24中的至少一种的定量检测试剂。本发明还公开了一种头颈部鳞癌标志物的定量检测方法。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种头颈部鳞癌标志物引物组合、检测试剂盒及其定量检测方法。

背景技术

头颈部鳞癌(Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck，SCCHN)是世界范围内第6大常见肿瘤。头颈部鳞癌包括喉癌、口腔癌、鼻咽癌、下咽癌等。2010年，美国疾病控制中心的统计结果表明，全球每年约50万人患头颈鳞癌，死亡人数约为12000人。近年来，虽然包括手术、放化疗等各种治疗方法均取得了巨大进展，但由于技术水平等诸多可观因素的限制，很多肿瘤在发现时已发展至中晚期，治疗手段局限，治疗效果及预后较差，生存率一直较低，头颈部鳞癌的5年生存率并没有明显提高，仍在60％左右。而早期肿瘤体积小，较少转移，如适时进行治疗可有效的控制肿瘤发展，治愈率可达83％，因此积极开展肿瘤的早期发现、诊断和早期治疗的研究，对于癌症的预防和控制有着重要的意义。

在临床上，外周血及其他体液的检测具有创伤小、可重复、可于同一时间点进行检测多项指标等优点，是疾病早期诊断的理想手段。在肺癌、肝癌等癌症的早期预防和诊断应用中，外周血肿瘤标志物的检测已成为重要的临床依据，如甲胎蛋白、癌抗原125、人癌胚抗原等。与口腔鳞状细胞癌(OSCC)相关的血清及唾液肿瘤标志物如Cyfra21-1、TPS、CEA、SCC、CA125和CA19-9也有许多研究，然而其在头颈部鳞癌症诊断中，由于缺乏灵敏性及特异性，并没有得到广泛应用。

因此，寻找可以作为头颈部鳞癌诊断的肿瘤标志物及其检测方法，可以开拓头颈部鳞癌早期诊断的新方法，具有迫切的临床需求和广阔的应用前景。

发明内容

基于此，有必要提供一种简便使用的头颈部鳞癌标志物引物组合、检测试剂盒及其定量检测方法。

一种用于检测头颈部鳞癌标志物的引物组合，包括用于miR-10b定量检测的正向引物、用于miR-31定量检测的正向引物、用于miR-24定量检测的正向引物中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述引物组合包括用于miR-10b定量检测的正向引物、所述用于miR-31定量检测的正向引物、所述用于miR-24定量检测的正向引物中的两种或三种的组合。

在其中一个实施例中，所述用于miR-10b定量检测的正向引物的序列如SEQ IDNO.1所示。

在其中一个实施例中，所述用于miR-31定量检测的正向引物的序列如SEQ IDNO.2所示。

在其中一个实施例中，所述用于miR-24定量检测的正向引物的序列如SEQ IDNO.3所示。

一种头颈部鳞癌标志物检测试剂盒，包括用于定量检测miR-10b、miR-31、miR-24中的至少一种的定量检测试剂。

在其中一个实施例中，所述定量检测试剂包括所述的用于检测头颈部鳞癌标志物的引物组合。

在其中一个实施例中，所述定量检测试剂还包括反向引物，所述反向引物的序列如SEQ ID NO.4所示。

在其中一个实施例中，所述定量检测试剂还包括PCR反应试剂，所述PCR反应试剂包括逆转录PCR反应试剂和实时定量PCR反应试剂。

一种头颈部鳞癌标志物的定量检测方法，包括以下步骤：

取预定量的待检测样品，提取总RNA；