[发明专利]一种前列腺癌检测探针序列及其应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种前列腺癌检测探针序列及其应用。本发明所述探针序列包括捕获延伸探针、K型标记延伸探针和封闭探针。本发明针对前列腺癌PCA3进行捕获延伸探针、K型标记探针以及封闭探针的设计和人为优化，进一步提高了基于类似bDNA和QuantiMAT技术对前列腺癌细胞检测的特异性，表现出较佳的定量限、检测限以及灵敏度，并可应用于此类试剂盒的制备中。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种前列腺癌检测探针序列及其应用。

背景技术

PCA3即新型前列腺癌抗原3，PCA3在1995年由Johns Hopkins Hospital(Baltimore)和Radboud University(Nijmegen,Netherlands)合作研究发现，最初命名为DD3(differential display clone，3)因为使用差别显示分析(在那时是一种新的描述方法，用于识别不同组织中的基因表达)对比正常vs癌变前列腺组织的mRNA表达模式，发现一种mRNA在前列腺癌症中高特异性表达。

PCA3在95％的检测的全部前列腺癌中过度表达，可从癌变前列腺细胞中无害测定，准确度接近100％。此外，在前列腺外组织(良性和恶性)中尚未检测到PCA3转录，证明PCA3是目前已知前列腺癌最具特异性的PCa标志物。不像血清PSA，PCA3不受年龄，前列腺体积或其他前列腺病(前列腺炎)的影响。

BUSSEMAKERS等通过Northern blot法分析正常前列腺、良性前列腺增生和前列腺癌细胞及其转移灶发现，PCA3基因特异性地高表达于人类前列腺癌细胞和转移坏死灶中，在正常前列腺、良性前列腺增生细胞中不表达或低表达。且PCA3mRNA的表达水平与前列腺癌Gleason病理分级有关。相比之下，在良性和恶性前列腺疾病的患者之间，PSA mRNA水平差异无显著性。BUSSEMAKERS等还发现在正常人，除前列腺外的18种组织器官中均检测不到PCA3基因表达。HES-SELS等还对108例PSA3ng/mL的患者行前列腺穿刺活检，用时间分辨荧光定量RT-PCR检测前列腺穿刺活检组织中的PCA3mRNA，发现PCA3mRNA在非恶性前列腺组织和良性前列腺增生组织之间差异无显著性。在前列腺癌中，癌细胞数大于10％的前列腺癌标本的PCA3mRNA拷贝数是非恶性前列腺组织的66倍。癌细胞数少于10％的前列腺癌标本的PCA3mRNA拷贝数是非恶性前列腺组织的11倍。LANDERS等用实时定量PCR检测前列腺癌组织中的PCA3mRNA表达，证实前列腺癌组织中DD3是良性前列腺增生组织的140倍。由此可见，PCA3特异性高表达于前列腺癌细胞，在正常前列腺或良性前列腺增生组织中不表达或低表达。因此PCA3适合作为前列腺癌特异性标志物。

现有专利CN105861669A公开了一种快速捕获杂交靶标物分支链DNA信号放大的检测方法(QuantiMAT技术)，其灵敏度和耗时均优于bDNA技术。在其实施例中提供了检测高危型人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7区域的相关试验。但是不同的QuantiMAT探针序列对于前列腺癌、宫颈癌等各种癌症的特异性有着最为直接的影响，依照ProbeDesigner V1.0工具设计出的针对PCA3的QuantiMAT探针序列，在检测前列腺癌时并不能保证具备较高的特异性，致使定量限(LOQ)、检测限(LOD)以及灵敏度受到影响。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种前列腺癌检测探针序列及其应用，使得所述探针序列能够检测前列腺癌，并具备较高的特异性，可应用于前列腺癌检测相关应用中。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

一种前列腺癌检测探针序列，包括捕获延伸探针、K型标记延伸探针和封闭探针；其中，所述捕获延伸探针序列如SEQ ID No.1-14和SEQ ID No.78-85所示，所述K型标记延伸探针如SEQ ID No.15-64和SEQ ID No.86-131所示，所述封闭探针如SEQ ID No.65-77和SEQ ID No.132-148所示。