[发明专利]一种诱导辣椒疫霉菌产孢的培养基、制备方法及应用

说明书

本发明属于培养基技术领域，公开了一种诱导辣椒疫霉菌快速产生大量游动孢子囊的培养基、制备方法及应用。所述培养基以橙子汁为主要原料，pH值适宜，营养丰富，包括多种无机及有机营养物，如糖类、蛋白质及维生素B1、维生素C等，提供了辣椒疫霉菌生长所需的各类营养物质，更有利于辣椒疫霉菌孢子囊的形成。利用该培养基，短期内即可诱导大量的游动孢子囊，试验证明：24h内每平方厘米的菌丝块产生的游动孢子囊数量高达3.19万，既解决了一般固体培养基很难产生大量孢子囊的问题，又避免了利用水培法诱导产生游动孢子囊容易被污染的难题。

技术领域

本发明属于培养基技术领域，涉及一种诱导辣椒疫霉菌产孢的培养基，更具体地，涉及一种诱导辣椒疫霉菌快速产生大量游动孢子囊的培养基、制备方法及应用。

背景技术

辣椒疫病(Phytophthora capsici)是一种世界范围内的毁灭性病害，其是由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)侵染引起的。辣椒疫霉菌属植物病原卵菌，其病原菌通常以卵孢子和厚垣孢子在病株残体上、土壤中和种子上越冬，成为来年病害发生的初侵染源头，发病后病部产生孢子囊，孢子囊借助风、雨、灌水及其他农事活动进行再侵染，造成病害的蔓延和危害。除危害辣椒外，辣椒疫霉菌还侵染番茄、茄子、黄瓜、西瓜、南瓜等20多种重要蔬菜作物。该病害自1918年首次在美国新墨西哥发现起，现已在全世界范围内发生，并有逐年加重的趋势，严重影响了蔬菜种植业的经济效益，给蔬菜的安全生产造成了巨大的经济损失。因此，如何有效地对辣椒疫病进行综合管理并最大化降低其造成的经济损失是亟待解决的技术问题。

研究并明确辣椒疫病发生流行规律是制定病害综合管理措施的前提条件，研究病害流行规律需借助病原菌人工接种技术，而通过分离纯化获得目标病原菌的纯培养，再由纯培养获得大量的人工接种体是人工接种的第一步。在辣椒疫病的研究中，人工接种体是游动孢子，传统获得游动孢子的方法是获得孢子囊，再通过刺激孢子囊释放游动孢子，从而获得最终的接种体。辣椒疫霉菌产生孢子囊的常规方法是利用固体培养基如马铃薯琼脂培养基、玉米粉培养基、胡萝卜培养基、燕麦培养基等通过一定时间的光照培养，或将菌丝块加到无菌水内诱导产生孢子囊的水培法，前者产孢时间长且很难得到大量孢子囊，后者虽然能快速获得大量游动孢子囊，但操作步骤繁琐，且操作过程中易被其他杂菌污染。

发明内容

因此，本发明旨在提供一种能快速高效诱导辣椒疫霉菌产生大量游动孢子囊的培养基。

为此，本发明提供了一种诱导辣椒疫霉菌产孢的培养基，所述培养基以橙子汁为碳源，每升所述培养基中含有橙子汁25～75mL。

进一步地，每升所述培养基还含有琼脂15～20g。

进一步地，所述培养基的pH为5.5～6.5。

本发明还提供了一种上述诱导辣椒疫霉菌产孢的培养基的制备方法，，包括如下步骤：

在所述橙子汁中加入所述琼脂，加水定容，混合后灭菌，即得所述诱导辣椒疫霉菌产孢的培养基。

进一步地，所述灭菌具体为：在120～125℃、0.10～0.12MPa下灭菌15～25min。

进一步地，加入所述琼脂前还包括对所述橙子汁进行过滤处理。

更进一步地，所述过滤采用双层纱布过滤。

上述诱导辣椒疫霉菌产孢的培养基或根据上述诱导辣椒疫霉菌产孢的培养基的制备方法得到的诱导辣椒疫霉菌产孢的培养基诱导辣椒疫霉菌产生孢子囊的方法，包括如下步骤：

(1)将辣椒疫霉菌菌丝块接种于所述诱导辣椒疫霉菌产孢的培养基上，置于25～28℃黑暗培养，直至菌丝长满培养基；

(2)将步骤(1)的培养基体系置于光照度为1600～2400lx下连续光照培养1～2天即可。