[发明专利]一种用于检测高血压用药相关基因的引物组合物及试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于检测高血压用药相关基因的引物组合物及试剂盒，引物组合物包括NPPA引物组、ADRB1引物组、CYP2D6引物组、AGTR1引物组、CYP2C9引物组、CYP3A5引物组及GNB3引物组；试剂盒包括上述引物组合物。与现有技术相比，本发明釆用ARMS技术与SYBR染料相结合的方法，得到一种能够快速、敏感而且简便地检测高血压用药相关基因(NPPA、ADRB1、CYP2D6、AGTR1、CYP2C9、CYP3A5和GNB3)基因多态性的试剂盒，该试剂盒包括特异性ARMS检测引物、内控引物及PCR反应液，通过设计ARMS检测引物并将Scorpions探针替换为SYBR染料，以使检测成本大大降低，更适合中国患者NPPA、ADRB1、CYP2D6、AGTR1、CYP2C9、CYP3A5和GNB3基因多态性的检测，具有检测快速、灵敏度高、特异性强、方法简单、结果准确的优势，适于推广应用。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，涉及一种用于检测高血压用药相关基因的引物组合物及试剂盒。

背景技术

利尿剂降压始于1948年，自1957年氯噻嗪(chlorothiazide)问世30多年期间，以氢氯噻嗪(双氢克尿塞，hydrochlorothiazide)为主的噻嗪类利尿剂一直是抗高血压药物的主力军之一，不论单用或与其他抗高血压药物联用，都有明确的疗效。几十年来国际大规模临床试验结果，进一步确定了它在降压治疗中的地位。欧美几个高血压处理原则委员会都建议无并发症的高血压病人，以利尿剂为首选药物。近年来，新型利尿剂吲达帕胺(寿比山，indapmide)的上市，使利尿剂在高血压病的治疗地位又有新的提高，它的特点是常用剂量仅表现为轻微的利尿作用，主要表现为血管扩张作用，降压有效率在80％左右，且不存在传统利尿剂的代谢异常副作用，已在临床广泛应用。心房钠尿肽前体A(natriureticpeptide precursor A，NPPA)是研究多种疾病遗传易感性的“候选基因”，位于人染色体1p36.22，由三个外显子和2个内含子组成，在体内首先合成含151个氨基酸的前ANP原(prepro-ANP)，经过一系列加工得到羧基末端99-126位氨基酸所组成的肽链，即ANP，其中17个氨基酸构成的环是其发挥生物活性的必需结构。心房钠尿肽(ANP)是由心房肌细胞合成和分泌的具有排钠利尿、扩张血管及抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)作用的物质，编码其前体物质(NPPA)基因的第3号外显子上存在T2238C突变，可能通过改变血浆ANP的浓度而影响降压治疗。研究发现，此位点上具有C等位基因的患者服用利尿剂比服用其他种类的降压药疗效更好，且更有利于减少心脑血管疾病的发生。研究发现，NPPA T2238C基因突变型患者对利尿药的反应更为敏感治疗效果好，而非突变患者对使用钙离子拮抗药效果更佳，检测NPPA基因型有利于患者选择适合于自己的抗高血压药物，防止远期副反应的发生。对于TT基因型患者，选择氨氯地平优于其他利尿类以及血管紧张素转化酶抑制剂。

β受体阻滞剂是能选择性地与β肾上腺素受体结合、从而拮抗神经递质和儿茶酚胺对β受体的激动作用的一种药物类型。肾上腺素受体分布于大部分交感神经节后纤维所支配的效应器细胞膜上，其受体分为3种类型，可激动引起心率和心肌收缩力增加、支气管扩张、血管舒张、内脏平滑肌松弛和脂肪分解等，这些效应均可被β受体阻滞剂所阻断和拮抗。人类Beta1肾上腺受体(ADRB1)蛋白是Beta1肾上腺受体阻断药的作用靶点，研究发现ADRB1蛋白参与血压调控，是心脏交感神经肾上腺功能系统信号通路中的主要蛋白。Arg389Gly多态性位于细胞内羧基端，能影响配体介导的腺苷酸环化酶活性以及G蛋白偶联功能，从而影响心率和血压。ADRB1基因型的差异可能是ADRB1阻滞剂的降压疗效具有个体差异的原因之一。研究发现，ADRB1基因型为突变杂合子(Gly389Arg)和突变纯合子(Arg389Arg)的患者对Beta1受体阻断药较为敏感，而基因型为野生纯合子(Gly389Gly)对药物不敏感。